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標題: 豬瘟病毒基因的分子選殖
Molecular cloning of hog cholera virus genomic sequences
作者: 黃淑惠
HUANG, SHU-HUI
關鍵字: SWINE-FEVER
豬瘟
VIRUS
GENE
MOLECULE
HCV
病毒
基因
分子
豬瘟病毒
出版社: 獸醫研究所
摘要: 豬瘟病毒(HCV )是引起豬瘟的病原,以且RNA 做為其遺傳物質。為了做為日後進行 豬瘟病毒基因結構的研究,以及發展診斷用核酸探針及豬瘟次單位疫苗,有必要進行 豬瘟病毒基因的分子選殖。 本試驗由正常的初代仔豬睪丸(ST)細胞及HCV A 76株感染的ST細胞,分別在經Ac tinomycin D 處理或不經Actinomycin D 處理下抽取RNA 。以電泳分析所抽居的RNA ,發現在加有Actinomycin D 的情形下,只有一高分子量的病毒RNA 存在。 由HCV 感染的ST細胞中抽取到的病毒RNA ,以CFLL cellulose層析純化後做為合成, cDNA的模板。將所合成的cDNA接上EcoRI 人工接頭後,與載體pUC 18結合成重組DN A 分子,然後植入E ﹒coli DH 5α菌體內。初步以含有X ﹣gal 、IPTG及Ampicill in的篩選平板培養基篩選,選出具嵌入cDNA片段的菌落。再應用菌落雜丘方法,由具 cDNA片段的菌株中篩選得到只對病毒cDNA探針可雜合,而不與ST細胞cDNA雜合的菌株 。對於這些菌株,抽取其質體DNA ,以EcoRI 限制 切過後,再以瓊脂電泳分析嵌入 cDNA的長度。其嵌入cDNA長度最短為390鹼基對,而最長的則有2800鹼基對。 最後以點跡雜合反應(Dot ﹣blot hybridization)再次確認,以經缺口移位反應標 幟的質體探針與ST細胞RNA 及HCV RNA 進行雜合。那些具有可與HCV RNA 雜合而不與 ST細胞RNA 雜合的質體的菌株,乃是含有豬瘟病毒基因之菌株。
URI: http://hdl.handle.net/11455/12947
顯示於類別:獸醫學系所

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