Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/13209
標題: 豬嗜血菌桿菌胸膜肺炎酵素結合免疫吸附試驗之建立與應用
Development and application of enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting haemophilus pleuropneumoniae antibody inswine
作者: 邱鴻英
GIU, HONG-YING
關鍵字: 
PIG
嗜血桿菌胸膜肺炎
酵素結合免疫吸附
野外檢體測定
血清學
HP
ELISA
出版社: 獸醫研究所
摘要: 本研究之主要目的,在探討台灣豬嗜血桿菌胸膜肺炎疫學上流行的菌型和病理變化; 及建立一敏感、安全、簡捷、精確、經濟的酵素結合免疫吸附試驗方法(Enzyme Li- nked Immunosorbent Assay , ELISA),並研究其特質和應用於疾病診斷的可行性。 本研究分為三大部,其一為採集豬場及肉品市場疑似病材進行胸膜肺炎嗜血桿菌(H- aemophilus pleuropneumoniae ,H.P.)細菌分離,菌型鑑定與病理變化之分析;其 二為比較H.P.菌分別以Sodium Dodeycl Sulfate(SDS)、Potassium thiocyanate( KSCN)、Ethylenediaminetetraacetic Acid(EDTA) 和熱處理的粗抗原與經Sepha- cryl S-200柱狀層析純化的可溶性抗原之ELISA 效果,並建立本ELISA 的最佳組 合條件;其三為將本ELISA 方法應用於大量野外檢體測定的可行性研究。 研究結果顯示:自1985年9月至1987年3月,共分離H.P.菌77株,其菌型 分屬第1、2、3、5型。本病主要呈現之病理變化以廣泛性、出血性、纖維素性化 膿性肋膜肺炎為主徵。經一系列測試與選擇所建立之ELISA 方法,最適當條件組合, 其結果如下:⑴抗原製備:抗原選用H.P.菌熱處理經Sephacryl S-200柱狀層析純 化第2峰收集物為ELISA 反應抗原。⑵反應盤之製備:抗原以37℃3小時或4℃隔 夜感作吸附於EIA 反應盤後,再經0.5%BSA-PBS 填補。⑶反應過程:測試血清以 PBST稀釋200X ,於37℃感作90∼120分鐘後加入抗豬IgG 山葵過氧化氫酵 素標示抗體,於37℃感作40分鐘,最後加入受質ABTS溶液於室溫避光感作15分 鐘。⑷判讀:以Dynatect MR-580 ELISA判讀機選用405/450nm雙波段判讀 結果。 應用所建立之ELISA 方法測試肉品市場與感染豬群血清H.P.抗體,且以傳統IHA方法比 較測定結果。肉品市場116頭血清檢體以ELISA 測試陽性率為95.69%, IHA 測試陽性率為69.8%。ELISA 與IHA 二方法比較,測試結果敏感性為96.3% ,相符性為69%。在感染豬群依⑴無臨床病徵⑵發病初期⑶發病極期⑷耐過期等4 個臨床病程之血清檢體,以ELISA 方法測定陽性率則依次為43.48%、71.4 3%、100%、100%;而以IHA 方法測定陽性率則各為82.6%、85.7 %、80.8%、及4.8%。此二種方法問之差異性亦作進一步探討。 本研究中所建立之ELISA 方法為具有特異性及高敏感性、簡單、價廉且適宜作大量檢 體篩檢之血清學診斷方法。
URI: http://hdl.handle.net/11455/13209
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