Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/13584
標題: 以聚合 連鎖反應偵測假性狂犬病毒核酸
DETECTION OF PSEUDORABIES VIRUS DNA SEQUENCES BY POLYMERASE CHAIN REACTION
作者: 陳貞夙
CHEN, ZHEN-SU
關鍵字: (POLYMERASE CHAIN REACTION

PC)
(PSEUDORABIES VIRUS:PRV)
(LATENT INFECTION)
(EXTENSION)
(HEAT DENATURATION)
聚合 連鎖反應
假性狂犬病毒核酸
潛伏性感染
引子延長
加熱變性
感受性
出版社: 獸醫研究所
摘要: 假性狂犬病毒(Pseudorabies virus;PRV)是引起豬只假性狂犬病的病因,已廣泛污染 臺灣大多數養豬場。本病造成仔豬高度的死亡率,情孕母豬的流產與死產,成豬易形 成潛伏性感染 (Latent infection) ,而成為本病之帶原者(virus-carrier) 。帶毒 豬偶而傳染病毒給具有感受性的動物,或由潛伏期復發本病而感染胎兒及及仔豬。因 而造成養豬場莫大的損失。為了尋求快速而敏感的診斷方法,本實驗利用聚合繪連鎖 反應(Polymerase chain reaction;PCR) 以偵測假性狂犬病毒之核酸,是一項被認可 的新技術,可以應用到臨床上偵測帶原者。 聚合繪連鎖反應是在試管中針對特定DNA 片段做大量的復制。本方法包含使用兩段位 於特定DNA 片段兩端的寡核喿引子(oligonucleotide primers) ,以Taq DNA 聚合繪 (Taq DNA ploymerase)經由加熱變性 (heat denaturation)分開雙股 DNA後,使 DNA 與引子吻合(annealing) ,後將吻合引子延長(extension) 以復制DNA 。每個周期可 使DNA 複製雙倍。結果DNA 之量以指數形式( 即2 ,N 指週期數) 而大量累積。 本實驗選用三套引子,分別選自醣蛋白gX基因 (Glycoprotein gX gene;gX gene) 立 即-早期蛋白基因(Immediate-early protein gene;IE gene)及臺灣 PRV TNL株經限 制 BamHl 切割第15片段 (BamHI-fragment 15)。三套引子皆與九株 PRV (七株是臺 灣分離株及兩株是美國分離株的DNA)及牛傳染性鼻氣管炎病毒 (Infectious bovine rhinotracheitis virus;IBRV) 的DNA 作用。結果發現選自gX基因的引子可以偵測九 株 PRV,但不與IBRV DNA反應,因此具有高度特異性。并且以此套引子進行敏感性試 驗,結果顯示聚合 連鎖反應偵測病毒核酸之敏感性可達 1 PFU感染單位之病毒及0. 1 pg的病毒核酸。因此,由實驗得知,以選自gX基因之引子進行聚合 連鎖反應可得 高度特異性,敏感性及快速診斷假性狂犬病的目的。
URI: http://hdl.handle.net/11455/13584
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