Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/15126
標題: 綠膿桿菌外毒素A引起大鼠肝毒性模式之建立
Pseudomonas aeruginosa exotoxin A induced hepatotoxicity:an animal model in rats
作者: 邱健昭
關鍵字: Exotoxin A
外毒素A
Hepatotoxicity
Apoptosis
肝毒性
細胞凋亡
出版社: 獸醫病理學研究所
摘要: 綠膿桿菌為一種機緣性感染菌,本菌在感染時會分泌外毒素(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A, PEA)及porin等多種毒力物質。PEA可引起實驗動物及人之肝毒性,基於此,本實驗致力於PEA引起大鼠肝毒性之機制研究,並建立大鼠之動物模式。實驗採用雄性六至七週齡SPF Wistar大鼠(每組三至五隻),靜脈注射0(對照組)、10、20、30、40及60μg/kg PEA,並在攻毒後12、24、36、48、60及72小時後犧牲動物。使用臨床觀察、組織病理切片、免疫化學染色法、TUNEL染色、DNA斷片電泳法、偵測血清生化(ALT, AST與黃疸指數)、偵測細胞素及免疫球蛋白等技術分析。結果,在40、60μg/kg劑量下,組織切片觀察中,攻毒後12小時即可看到多數CLAB出現,及引起門脈區及中心靜脈區壞死,且延伸為多發局部性壞死灶或大區域壞死灶,動物並分別在36及24小時內死亡。在20與部分30 μg/kg劑量下雖可造成肝毒性但動物卻可恢復,並在攻毒後60小時後可見ALT及AST下降,及分別於48及60小時可見肝細胞有絲分裂,呈現再生現象。在DNA斷片電泳法方面,在攻毒24小時後分別在30、40、60μg/kg劑量下可見明顯DNA Ladder,而20μg/kg以下劑量組則無此現象。而TUNEL染色則在20μg/kg劑量下,攻毒12小時後即可染出肝細胞發生凋亡,並隨著時間延長及劑量增加而更加嚴重。在10μg/kg劑量下各攻毒時間點,經由以上各種分析與對照組比較均無明顯變化。在細胞素測定方面,則發現在攻毒24小時40 μg/kg試驗組其血清中TNF-α的濃度有極顯著的上升,在24小時下30及40 μg/kg試驗組其IL-2的濃度有顯著的上升,而IL-6在60 μg/kg試驗組於攻毒後12小時有極顯著的上升、IL-10在30 μg/kg試驗組於攻毒後24小時開始上升至48小時為最高峰,而IFN-γ則只有在60μg/kg劑量組有少量出現。另外,免疫球蛋白IgM則在給予30μg/kg於攻毒48小時後大幅揚升,顯示動物如耐過PEA攻擊即可產生大量之IgM。本實驗結果發現由以上各種肝毒性評估方法中,免疫組織化學染色最為敏感,而其他方法可作為輔助診斷。並且由細胞素測定顯示其引起大鼠肝毒性與免疫細胞過度活化有關。由建立PEA引起大鼠之肝毒性模式,將來可用於致病機制與不同藥物對PEA引起肝毒性保護能力之探討。
URI: http://hdl.handle.net/11455/15126
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