Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/20756
標題: 十字花科蔬菜黑腐病菌噬菌體ψL0啟動子之分析與應用
作者: 傅金芬
關鍵字: 十字花科
黑腐病菌
出版社: 植物學研究所
摘要: ψLO是十字花科蔬菜黑腐病菌的烈噬性噬菌體。本研究首先建立其基因體 DNA 的Bg1II, EcoRI, EcoRI, BamHI, PstI, EcoRV及HindIII的鑑識酉每圖譜,並由鑑識酉每切割片段計算出基因體長約49kb。部份鑑識酉每切位之訂定係藉 Ba131刪短實驗以達成。同組實驗並確定ψLO之 DNA 為直線狀、無缺口的結構。其次,利用 DNA-DNA 雜配技術定出ψLO的轉錄圖譜。根據 RNA 合成的時間之先後,ψLO基因體大致可區分為轉錄極早期、早期及晚期基因等三個區域。由35S-methionine短時標定而得的轉譯模式,亦顯示出相似的時段性表現(temporal expression)。由上述二項結果可看出ψLO的發育(development)係經嚴密規劃,而做一定的順序進行。按著,利用啟動子選殖載體,由ψLO的基因體選殖到6個啟動子片段。其中,ψ3.04及ψ9位於極早期基因區域;ψ1.6位於早期基因區域;ψ0.37、ψ2.96及ψ3.29位於晚期基因區域。將以上6個片段加以核甘酸定序,能以 primer extension 定出轉錄起始點後發現,轉錄極早期基因的Pψ3.04及Pψ9,具有類似 E. coli σ54 辨認的啟動子序列 (SB-10 bps-GC),而且啟動子上游還有一段保守序列 AGGGTCT。轉錄早期基因的Pψ1.6具有多重類似 E. coli α70 辨認的啟動子 序列 (TTGACA-17±1bps-TATAAT)。而轉錄晚期基因的 Pψ0.37、 Pψ2.96及 Pψ3.29,則僅具一段類似 E. coli σ70 辨認的啟動子 序列。但在三個啟動子上游各有一段或兩段 AT rich的保守序列,在 Pψ0.37上有 CATTAAATT,在 Pψ2.96有 GAATTT,而 Pψ3.29則 二者兼有。最後,將表現最強的 Pψ1.6構築成β-半乳糖甘酉每表現 質體,並進一步將之嵌入十字花科蔬菜黑腐病菌的染色體上,分別成為 Xcl7(pKMψLT)及 Xc17::pSFψ14。二者均能利用乳糖為唯一碳源生產黃菌膠,且其產量與利用葡萄糖為碳源的野生株 Xcl7之產量相當,達到菌種改良之目的。其中,將 β-半乳糖甘酉每嵌人於染色體者 (Xcl7::pSFψ14)穩定性極高。
URI: http://hdl.handle.net/11455/20756
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