Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/20826
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dc.contributor.advisor賴美津zh_TW
dc.contributor.author莊文元zh_TW
dc.contributor.authorChuang, Wen-Yuanen_US
dc.date2006zh_TW
dc.date.accessioned2014-06-06T07:14:37Z-
dc.date.available2014-06-06T07:14:37Z-
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11455/20826-
dc.description.abstract本實驗評估新合成化合物 LUC 對於嗜中性白血球呼吸爆發作用的影響。LUC 以時間與濃度依存性方式抑制 formyl-Met-Leu-Phe (fMLP) 刺激大鼠嗜中性白血球產生超氧自由基,其 IC50 值為 4.5 ± 0.6 μM。LUC 抑制 fMLP 刺激嗜中性白血球產生超氧自由基的作用不具可逆性,並且對嗜中性白血球不產生細胞毒性。LUC 不會影響 phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 刺激嗜中性白血球超氧自由基的生成。LUC 不會清除 dihy-droxyfurmaric acid (DHF) 自體氧化產生超氧自由基。LUC 不會影響 fMLP 刺激嗜中性白血球所產生的 p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK)、extracellular signal-regulated kinase (ERK)、MAPK-activated protein kinase 2 (MAPKAPK2)、Akt(Thr308)、Akt(Ser473) 與 glycogen synthase kinase 3β(GSK3β) 的磷酸化作用。而LUC 會抑制蛋白質tyrosine磷酸化、phospholipase D (PLD) 的活性及細胞外 Ca2+ 流入,對這些訊息傳遞途徑的抑制作用可能參與了LUC阻斷 fMLP 刺激大鼠嗜中性白血球生成超氧自由基。zh_TW
dc.description.abstractIn the present study, the inhibition of superoxide anion generation by a novel synthetic compound LUC in rat neutrophils was examined. LUC inhibited formyl-Met-Leu-Phe (fMLP)-induced superoxide anion genera¬tion in a time- and concentration-dependent manner with an IC50 value of 4.5 ± 0.6 μM. LUC had no effect on phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)-induced response. Inhibition by LUC was irreversible and not caused by cytotoxic effect. LUC did not scavenge the generated superoxide during dihydroxyfumaric acid (DHF) autoxidation. LUC had no effect on the phosphorylation of p38 mito¬gen-activated protein kinase (MAPK)、extracellular signal-regulated kinase (ERK)、MAPK-activated protein kinase 2 (MAPKAPK2)、Akt(Thr308)、Akt(Ser473) and glycogen synthase kinase 3β(GSK3β) in response to fMLP stimulation. However, LUC attenu¬ated the fMLP-induced protein tyrosine phosphorylation and phospholipase D (PLD) activity, and blocked extracellu-lar Ca2+ entry. Inhibition of these signaling pathways is probably responsible for the inhibition of fMLP-induced superoxide anion generation by LUC in rat neutro¬phils.zh_TW
dc.description.tableofcontents目錄 縮寫表 iv 中文摘要 vi Abstract vii 第一章 序論 1 一、 前言 1 二、 嗜中性白血球的殺菌作用 1 三、 NADPH oxidase 2 四、 MAPK 7 五、 PI3K/Akt 8 六、 Phospholipase D (PLD) 11 七、 PLC與鈣離子 12 八、 Tyrosine kinase 15 第二章 實驗材料與方法 28 一、 實驗動物 28 二、 實驗藥品 28 三、 嗜中性白血球之分離 28 四、 藥物對嗜中性白血球細胞毒性之測量 29 五、 藥物對嗜中性白血球產生超氧自由基之測量 31 六、 藥物對超氧自由基直接清除作用之測量 31 七、 LUC對fMLP刺激細胞產生超氧自由基之可逆性 32 八、 測量細胞內p38 MAPK、MAPKAPK2、ERK、Akt、GSK 3β 與 tyrosine 的磷酸化程度 32 九、 藥物對細胞內 Ca2+ 濃度之測量 33 十、 測量細胞內PLD之活性 33 十一、 統計分析 35 第三章 實驗結果 40 一、 LUC對超氧自由基生成的影響 40 二、 LUC 對嗜中性白血球的毒性 41 三、 LUC 對 DHF 自體氧化反應的影響 41 四、 LUC 對 fMLP 刺激 p38 MAPK、MAPKAPK2 與 ERK 磷酸化的影響 41 五、 LUC 對 fMLP 刺激 Akt 與 GSK 3β 磷酸化的影響 42 六、 LUC 對 fMLP 刺激蛋白質tyrosine磷酸化的影響 43 七、 LUC 對 fMLP 刺激 PLD 活性的影響 43 八、 LUC 對 fMLP 刺激 PLCCa2+ 活化的影響 43 第四章 討論和結論 59 一、 討論 59 二、 結論 62 參考文獻 64 圖表目錄 表 3-1. LUC 對嗜中性白血球的細胞毒性 58 圖 1-1. 嗜中性白血球透過趨化作用到達感染處 17 圖 1-2. 嗜中性白血球的 oxygen-independent 與 dependent 殺菌機制 18 圖 1-3. 活化的 NADPH oxidase 產生超氧自由基 19 圖 1-4. NADPH oxidase 的 p40phox、p47phox 與 p67phox domain 結構 20 圖 1-5. p38 MAPK 與 ERK 的訊息傳遞路徑 21 圖 1-6. PI3K families 的 domain 結構 22 圖 1-7. PKB/Akt、PDK1 和 GSK3 的 domain 結構 23 圖 1-8. PI3K、Akt 與 GSK3 的訊息傳遞路徑 24 圖 1-9. 哺乳動物的 PLD domain 結構 25 圖 1-10. PLC 與 PLD 的訊息傳遞路徑 26 圖 1-11. 調控細胞內 Ca2+ 濃度的機制 27 圖 2-1. 利用LDH 偵測細胞毒性之原理 36 圖 2-2. Calcein-AM 偵測細胞毒性之原理 37 圖 2-3. NBT 偵測 DHF 自體氧化產生超氧自由基之原理 38 圖 2-4. PLD 與 PLC 對 PC 之作用 39 圖 3-1. LUC 時間依存性抑制 fMLP 刺激細胞產生超氧自由基 44 圖 3-2. LUC 濃度依存性抑制 fMLP 刺激細胞產生超氧自由基 45 圖 3-3. LUC 對PMA刺激嗜中性白血球產生超氧自由基之影響 46 圖 3-4. LUC 對 fMLP 刺激細胞產生超氧自由基之可逆性 47 圖 3-5. LUC 對 DHF 自體氧化之影響 48 圖 3-6. LUC 對 fMLP 刺激 p38 MAPK 磷酸化的影響 49 圖 3-7. LUC 對 fMLP 刺激 MAPKAPK2 磷酸化的影響 50 圖 3-8. LUC 對 fMLP 刺激 ERK 磷酸化的影響 51 圖 3-9. LUC 對 fMLP 刺激 Akt(Thr308) 磷酸化的影響 52 圖 3-10. LUC 對 fMLP 刺激 Akt(Ser473) 磷酸化的影響 53 圖 3-11. LUC 對 fMLP 刺激 GSK3β 磷酸化的影響 54 圖 3-12. LUC 對 fMLP 刺激蛋白質tyrosine磷酸化的影響 55 圖 3-13. LUC 濃度依存性對 PLD 活性之影響 56 圖 3-14. LUC 對 fMLP 刺激細胞造成增加 [Ca2+]i 之影響 57 圖 4-1. LUC 對嗜中性白血球產生超氧自由基可能的影響途徑 63zh_TW
dc.language.isoen_USzh_TW
dc.publisher生命科學系zh_TW
dc.subjectneutrophilen_US
dc.subject嗜中性白血球zh_TW
dc.subjectsuperoxideen_US
dc.subjectNADPH oxidaseen_US
dc.subject超氧自由基zh_TW
dc.titleLUC 抑制嗜中性白血球生成超氧自由基的研究zh_TW
dc.titleInhibitory Effect of LUC on Superoxide Anion Generation in Neutrophilsen_US
dc.typeThesis and Dissertationzh_TW
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