Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/21467
標題: 水稻α-澱粉水解酵素cDNA的選殖、定性及表現
Cloning characterization and expression of the rice α-amylase cDNA
作者: 華順發
Hua, Shun-Fa
關鍵字: FULL LENGTH
澱粉水解酵素
EXPRESSION LIBRARY
PLANT-SCIENCE
BOTANY
核 酸序列
胺基酸序列
訊號勝
植物科學
植物學
出版社: 植物學研究所
摘要: 本論文實驗自二個cDNA library中, 篩選到一個full length 的cDNA clone, 命名為 RAMYC 6 。經由DNA 序列分析法解讀出RAMYC 6 的核酸序列, 其分子量為1736 bp 。 再將之翻譯成胺基酸序列, 得知RAMYC 6 的α—amylase 是由435 個胺基酸所組成, 其中包含N-端可能為訊號勝的25個胺基酸。當除去訊號勝之後, 即成為成熟蛋白質。 分子量根據計算為45.1 KD。RAMYC 6 α-amylase mRNA的合成量會受缺糖處理的影響 而增加三倍以上。 接在酵母菌expression vector 中的GAP (Glyceraldehyde-3-phosphate-Dehydrogen ase)promoter之後之RAMYC 6 的5'端有二處ATG (第一個ATG 層於EcoRI的adaptor 部 分)二者千萬不同的胺基酸reading frame, 只有以第二個ATG 當起始密碼, 才能製造 正常的RAMYC 6 α-amylase; RAMYC 30的5'端則沒有ATG 。將RAMYC 6 和RAMYC 30分 別接上酵母菌的表現載體:: pYE8,構築成兩種新的質體, pYE8-6和pYE8-30。將pYE8- 6 和pYE8-30 分別送入酵母菌細胞內, 培養於含澱粉的選擇性培養基中, 結果顯示含 pYE8-6的酵母菌和含pYE8-30的酵母菌, 均會製造有功能的α-amylase 並分泌至培養 基中, 分解培養基中的澱粉。 抽取缺糖處理的水稻懸浮培養細胞的mRNA, 做成cDNA然後直接接上酵母菌的表現載體 pYE8, 構築成Expression library, 將Expression library送至酵母菌, 讓酵母菌來 篩選能產生正常功能且具分泌性的α- amylase 的 cDNA clone , 經由這個實驗, 肯 以酵母菌菌落雜交法證實, 我們獲得二個水稻α-amylase cDNA clone。
URI: http://hdl.handle.net/11455/21467
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