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標題: Preparation and Characterization of the Monoclonal Antibody to Serogroup Y Neisseria meningitidis
製備抗Y群腦膜炎球菌之單株抗體及其特性分析
作者: 郭彥良
Kuo, Yen-Liang
關鍵字: Neisseria meningitidis
奈瑟氏腦膜炎球菌
PorA
外膜蛋白PorA
單株抗體
出版社: 分子生物學研究所
摘要: 奈瑟氏腦膜炎球菌 (Neisseria meningitidis) 是一種具有多醣莢膜的革籣氏陰性球菌。根據莢膜多醣的化學組成,腦膜炎球菌可分為12個血清群 (Serogroups),其中 A、B、C、Y 及 W-135 五群為重要的人類病源菌,能引起腦脊髓膜炎與腦膜炎球菌菌血症。另外,根據外膜蛋白之抗原性的差異可分為不同的血清型以及副血清型。本研究的主要目的是製備對血清群Y腦膜炎球菌具有辨識能力的單株抗體,並從中找出具有補體依靠殺菌活性 (complement dependent bactericidal activity) 之抗體,進行進一步之分析,希望能找出此類抗體之抗原表位,作為研發腦膜炎球菌疫苗之根據。本研究從融合瘤細胞的製備中陸續地分離出8株抗腦膜炎球菌 GpYⅡ 之單株抗體。由 ELISA 分析以及西方轉漬分析結果推測 mAb 18-205可能是辨識到非蛋白抗原;mAb 23-08 是屬於 polyreactive natural autoantibodies (NAA);mAb 12-01 可能是辨識到class Ⅳ 外膜蛋白。在八株單株抗體中只有 mAb 210-06 具有良好之補體依靠殺菌活性。綜合西方轉漬分析、蛋白質譜分析及重組基因分析結果,確定 mAb 210-06 所結合的抗原為腦膜炎球菌的 class Ⅰ 外膜蛋白 PorA。利用噬菌體展示技術、PorA序列分析及副血清型分析結果,定出 mAb 210-06 所辨識之 PorA 區域為 P1.2 副血清型的VR2 序列 (HFVQQTPKSQPTLVP),其結合位置包含 QTPK 片段,其中第三個位置的胺基酸可能不參與和抗體的直接結合。另外,本研究也以 pET21 的表現系統建立了腦膜炎球菌之 PorA 蛋白在 E. coli 中的表現,對於 PorA 蛋白的進一步研究將會有所助益。
URI: http://hdl.handle.net/11455/21517
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