Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/23872
標題: 轉錄因子CREB之KID區域參與不同蛋白交互作用之結合區域分析
作者: 陳怡菁
Chen, Yi-Ching
關鍵字: 轉錄因子
CREB
結合區域分析
KID
FHL2
出版社: 生物化學研究所
摘要: 轉錄活化因子CREB是一個與CREM蛋白同源的蛋白;由過去文獻已知CREB和CBP的結合是藉由CREB 中屬於非結構性蛋白的KID區域 ,其包含需磷酸化的Ser 133在內的11個胺基酸與CBP中的KIX區域結合。由過去的研究得知,在男性的睪丸細胞,其CREM中的Ser 117不需要磷酸化便可與LIM-only蛋白ACT (activator of CREM in testis)結合;而在人類心臟大量表現,並且與ACT的胺基酸序列相似度達80%的FHL2 (four and half LIM-only proten 2)蛋白也會與Ser 133 未經磷酸化的CREB結合。 我在CREB內的KID區域中設計了13株His-CREB單點突變蛋白與GST-FHL2藉由GST pull down的實驗方法分析各個點突變蛋白對FHL2結合之影響。已知目前所挑選的這13個突變位置並不會影響CREB與FHL2的結合;因此 FHL2與CREB的結合位置有可能不在和KIX binding 所須之KID區域內;而另一種可能是CREB與FHL2的結合位置不僅止於P box內,而是還有其他區域的參與,例如Q1或Q2;因此單一的點突變實驗無法產生足以被現有方法偵測到的影響。接著進一步構築一個只包含目前這13株突變蛋白位置之KID,稱做KID29,表現蛋白後進一步確認FHL2並不會與此一KID29區域結合,顯示KID區域中參與KIX結合的胺基酸序列並不參與FHL2的結合。 由目前的結果得知,KID區域中參與KIX結合的胺基酸與KID區域參與FHL2的胺基酸是不相同的,未來若要近一步找出參與FHL2結合的KID區域中的胺基酸有哪些,需再設計KID29位置以外的點突變進而得知參與FHL2結合的胺基酸有哪些。
URI: http://hdl.handle.net/11455/23872
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