Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/29174
標題: 甘藍基因轉移之研究
Studies on gene transfer into cabbage (brassica oleracea l var. capitata)
作者: 許家言
XU, JIA-YAN
關鍵字: HORTICULTURE
甘藍基因
AGRICULTURE
轉移
研究
園藝
農業
出版社: 園藝研究所
摘要: 本研究以甘藍為材料,利用幾種基因轉移的方法,將 GUS報導基因轉移到甘藍,並 以轉殖後之 GUS基因表現的活性為依據,探討各種基因轉移法之適當條件。研究結 果顯示,農悍菌法以下胚軸組織感染後之相對轉殖率最高。品種間之轉殖成功率差 異不大,以「夏秋」品種最高 (4.38%),「初秋」、「高峰」與「夏峰」三品種均 在 3∼3.5%之間。基因鎗轉移宜以成熟胚及莖頂分生組織為材料,在真空度為 600 mmHg配合 circular form DNA可達到100%之 GUS transient activity 效果,但轉 殖後會隨組織發育逐漸消失 GUS活性,表示並非為stable integration。PEG 法以 15%之PEG濃度較20%與25%為佳,轉殖之緩衝溶液以MaMg較佳,採 linear form DNA 及不加入 carrier DNA可達到佳之轉殖效率。電穿孔法以在 MKM8p-N培養基中進行 ,並使用 circular DNA及加入 carrier DNA之轉殖效果最佳。Beakon 2000基因轉 移系統以9.5kv, 62.5μ sec pulse time, 2 ×5 pulse×cycle no., 0.1 sce burst time, Omm (contact) distance 轉殖效果最佳,Bio-rad基因轉移系統使用 960μF, 250v/cm, 200Ω , 62∼63msec 之條件最適合甘藍之基因轉移。如果以電 穿孔法及 PEG同時使用,比單獨使用之效果更佳。 本試驗除進行GUS報導基因之轉移外,並同時進行其他構造基因(structural genes )-抗凍蛋白基因(AFP),鎘結合蛋白基因(MTⅡ)與蘇力菌內毒素 (B.T.)基因的轉移 。依據相同於 GUS報導基因之適當轉移法送入甘藍,檢視轉移之效果。雖然「夏秋 」品種甘藍之原生質體可經由semi-solis agarose plate之初期培養配合agrose- bead type culture 之中期培養而可再生出完整之植株,但經由轉殖成功之call- us卻無法分化,此尚待進一步研究解決之道。經基因鎗轉移之植株 GUS組織化學染 色分析 GUS活性,發現全部為transient expression。農桿菌轉移於 kanamycin選 擇性培養基中,篩選出60株抗 kanamycin植株,經由 GUS組織化學分檢定有48株表 現 GUS基因活性。
URI: http://hdl.handle.net/11455/29174
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