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標題: Expression of Hepatitis B Virus Surface Antigen Using Instact Polyhedrin Gene Promoter of Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus
利用家蠶核多角體病毒完整多角體蛋白基因啟動子表現B型肝炎表面抗原
作者: 鍾瑞珍
Chung, Jui-Chen
關鍵字: 家蠶核多角體病毒
B型肝炎
出版社: 昆蟲學研究所
摘要: 本研究之目的在構築具備完整多角體蛋白基因啟動子之家蠶核多角體病毒置換載體,為便利重組病毒之篩選及純化,此載體同時具備大腸桿菌半乳糖甘酉每基因,此基因受苜蓿夜蛾核多角體病毒多角體蛋白基因啟動子之調控。為便利構築過程中抽取單股去氧核糖核酸,以進行核甘酸定序或定點突變,並殖入線狀噬菌體去氧核糖核酸之複製起始點區城,此段複製起始點區域係利用聚合酉每鏈反應合成。完整之多角體蛋白基因啟動子片段來自本實驗室過去構築之融合性核多角體病毒置換載體 pBmT227S7,其上核多角體轉譯起始點經定點突變,使具備限制酉每XbaI切割點,以此限制酉每及啟動子上游另一限制酉每切割所得片段,取代本實驗室過去構築之非融合性核多角體病毒置換載體pBmT324U(R) 中缺失十八個核甘酸之核多角體蛋白基因啟動子片段。構築完成之置換載體 pBmT524MU(R),其結構經限制酉每切割及局部核甘酸定序確定無誤。繼而將 B型肝炎表面抗原基因殖入此完整核多角體蛋白基因啟動子之下游,與野生型家蠶核多角體病毒去氧核糖核酸藉共同轉染送入家蠶細胞株中,於含半乳糖甘酉每指示劑之洋菜培養基上篩選藍色重組病毒,純化過程中藍色重組病毒始終雜有核多角體,以 B型肝炎抗體偵測呈陰性反應,經由去氧核糖核酸雜合反應亦偵測到極弱或偵測不到 B型肝炎表面抗原基因。
URI: http://hdl.handle.net/11455/30327
顯示於類別:昆蟲學系

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