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標題: 灰黴病菌之生理生態特性及其快速偵測法之開發
Physiological and ecological characterization and development of repid detection of Botrytis spp.
作者: 陳天枝
Chen, Tien-Chin
關鍵字: Botrytis
灰黴病菌
Physiological
ecological
detection
生理
生態
偵測
出版社: 植物病理學系
摘要: 溫度對灰黴病菌菌絲生長之影響在菌種間有相似的結果,由觀察得知灰徽 病在4~24℃時其溫度適應性良好,唯B. elliptica 較B. cinerea與B. gladiolorum生長快速,溫度適應性亦較好,B. cinerea菌絲生長適溫為8 ~24℃,在4℃時雖生長較為緩慢,但不受影響,在28℃時於生長3~4天後 則生長受抑制,32℃則菌絲受抑制無法生長,在28℃與32℃定溫培養一週 受抑制之菌絲,若將其再放置4~24℃下培養,28℃受抑制之菌絲可恢復生 長,而32℃則無法再生長。而B. gladiolorum菌絲在24℃生長較為緩慢, 較不適合高溫生長,再將B. cinerea菌絲於各溫度再繼代培養,於95%可 信賴度下每日生長長度並無明顯差異,但以平均值而言,則20~24℃生長 較佳。灰黴病菌所產生的菌核大小並不一致,菌核數目與其重量亦並不成 正比。B. cinerea 於4~20℃均能產生菌核,B. elliptica則為8~24℃最 適溫度皆為8~20℃。B.cinerea之菌核在8~28℃均可發芽生長,但在低溫 時發芽所需時間較長。發芽率在各溫度無明顯差異,菌核再形成數則以12 ℃最多,8、20和12℃次之,28℃則無菌核再形成,唯在28℃時,菌核發 芽後一週,菌絲即停止生長。B. cinerea 與 B. elliptica於8~28℃均能 產生胞子最適溫度皆為12~20℃,但在8、24與28℃時則B. cinerea較 B. elliptica 產生胞子能力為佳。而B. gladiolorum菌絲產生胞子最適溫度 則為16~20℃,在8℃則無胞子產生。B. cinerea之胞子在8~28℃,8小時 時皆有90%以上之發芽率,發芽管生長長度則在20~24℃時較長,16及24小 時後觀察結果亦相同,唯在4℃時則需24小時後方能發芽,而在32℃時胞 子不發芽;B. elliptica除在4℃時則需16小時後就能發芽外,其餘結果 和B. cinerea相似。B. cinerea B. gladiolorum與 B. elliptica於水 分潛勢-7.3bar~-70bar均能生長,最適水分潛勢為-31 bar 。且在以 sucrose為基質的PDA培養基中生長皆較優於在以KCl為基質相同水分潛勢 的PDA培養基中,在以sucrose為基質的PDA培養基中,B. cinerea B. gladiolorum與 B. elliptica於-7.3bar~-70bar胞子均有90%以上的發芽 率,唯B. gladiolorum在-44bar 發芽率僅有18%,至-70 bar時則無胞子 發芽 。生長在以KCl為基質相同水分潛勢的PDA培養基中-7.3bar~-59.5 bar胞子均有90%以上的發芽率,在水分潛勢至-70 bar時則無胞子發芽 。B. cinerea 及B. elliptica之胞子在20℃相對濕度為85%~100%時,8 小時時皆有90%以上之發芽率,發芽管生長長度並無明顯差異,在無水亦 無PDA及有水且無PDA之對照組CK1、CK2發芽率皆為0,而無水有PDA之對照 組CK3和相對濕度為100%時之發芽率相似。B. gladiolorum 菌核對連續 高溫的耐受性及其殘存力最強,在32℃、36℃連續高溫三週後亦發芽,但 其菌核放置於含田間土之玻璃培養皿內則發芽率將會下降。而B. cinerea 則在36℃連續高溫一週後即無法發芽,若將菌核放置於含田間土之玻璃培 養皿內即使在32℃連續高溫一週後亦無法發芽。B. cinerea B. gladiolorum 與 B. elliptica在12小時之日夜溫差時,並不影響其菌核 之發芽率,但對於菌絲生長則有明顯之抑制。在此日夜溫差培養箱中培養 一個月後,並無菌核與胞子產生。但將其再放置20℃定溫培養,菌絲可恢 復生長能力。B. cinerea B. gladiolorum 與 B. elliptica培養於PDA 培養基,一組以720 lux 照光處理,'一組以黑暗處理,兩組相較之下, 發現菌核發芽數目及菌絲生長並無明顯差異,而3週後B. gladiolorum在 黑暗處理有明顯促進菌核之形成。利用掃描式電子顥微鏡60倍觀察菌核表 面構造,可觀察出B. elliptica較B. elliptica之表面構造為堅固且緊密 。2000倍觀察菌核表面構造可觀察出小群的菌絲集合形成之苞芽( primordia)。自B. cinere菌株WFFr103與B. elliptica菌株EPL803之粒腺 體核酸經限制酵素EcoRI處理後,分別與載體pBluescript SK+ 接合,再 轉型到E. coli DH5*菌株,各構築一基因庫,並由其中各逢機選取3個選 殖株,以經轉殖株回收之mtDNA片段製備成的核酸探針與其餘菌株之全DNA 進行點雜配反應目前所篩選之核酸探針以BE83-8(0.9kb)之敏感度最高可 達10-5*g;核酸探針BE83-4B(1.2kb)則與所收集之B. cinere和B. elliptica菌株皆有反應出現,以引子 OPW-05進行隨機增幅核酸性(RAPD) 技術增幅灰黴病菌DNA,將增幅後的DNA片段經電泳分析發現Botrytis cinerea除CJFr118外皆有450bp左右之條帶產生。在Botrytis gladiolorum、Botrytis elliptica皆有450bp及700 bp左右之條帶產生。 在其他9株對照組真菌菌株則皆無450bp左右之條帶產生,以引子 OPB-17 進行的RAPD實驗經電泳分析發現Botrytis cinerea 、Botrytis gladiolorum除 TTF115外皆有300 bp左右之條帶產生,除JZF118、TSF119 外皆有600 bp、800bp左右之條帶產生。在Botrytis elliptica皆有600 bp、800bp左右之條帶產生。在其他9株對照組真菌菌株則皆無300b左右之 條帶產生。Botrytis cinerea之偵測。以引子 OPW-02進行RAPD實驗經電 泳分析發現Botrytis cinerea、Botrytis gladiolorum、Botrytis elliptica皆有700bp左右之條帶產生。
URI: http://hdl.handle.net/11455/31432
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