Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/31660
標題: Ti二位元載體媒介的木瓜轉型作用
作者: 鄭櫻慧
ZHENG, YING-HUI
關鍵字: 木瓜
轉型作用
木瓜輪點病毒
病毒鞘蛋白基因
植物染色體
Ti二位元載體媒介
(PAPAYA-RING-SPOT-VIRUS)
出版社: 植物病理學研究所
摘要: 本瓜(Carica papaya L.)是臺灣最重要的熱帶果園之一, 其產量, 品質都深受本瓜輪 點病毒(papaya ring spot virus)病害影響, 交互保護為防治此病害較有效的方法, 以病毒鞘蛋白基因產並入植物染色體, 使植物產生鞘蛋白面有防止病毒侵入感染的現 象稱為遣傳工程的交互保護, 此一現象已在多種病毒獲得證實, 外來基因曾利用具有 腫瘤基因的SEV 載體系統導入木瓜細胞, 本實驗則利用不具腫瘤基因的二位元載體系 統嘗試將抗kanamycin 基因及GUS(β-glucuronidase) 基因導入木瓜細胞, 另外亦構 築一轉型 PRV CP 基因的載體: 帶有抗kanamycin 及GUS 基因的pBI 121 在E. coli 複殖後經 triparental mating 轉移到 Agrobacterium tumefaciens。本瓜葉柄移殖體和 A. tumefaciens LBA 4404 /pBI 121共同培養兩天後, 移到含kanamycin 的愈合組織生長培養基篩選轉型細胞, 利用 GUS之DNA 為探針, 可偵測到並入轉型細胞染色體之GUS 基因及轉錄出之mRNA以 GUS 之抗血清可偵測到轉型翦台組織中之GUS 蛋白, 另外, 以螢光基因分析法可偵測 到GUS 的酵素活性。 構築轉型PRV CP基因的載體時, 必須突變產生一個含有起始碼(initiation codon)的 監識 切位, 首先將GUS 基因的 SmaI/SacI片段轉殖到pGEM質體含有pGEM之E. coli 受到協助噬菌體(helper phege) R408 感染時, pGEM以單股型態受到噬菌體鞘蛋白包 被, 穿過細胞質游離在培養液中, 單股DNA 抽出後作為生體外突變的
URI: http://hdl.handle.net/11455/31660
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