Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/3489
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dc.contributor.advisor曾文祺zh_TW
dc.contributor.advisor鄭如忠zh_TW
dc.contributor.author鍾家旻zh_TW
dc.date2002zh_TW
dc.date.accessioned2014-06-06T05:32:02Z-
dc.date.available2014-06-06T05:32:02Z-
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11455/3489-
dc.description.abstract本實驗主要利用牛血清白蛋白與胎牛血清做為體內模擬的環境 來探討非病毒型載體在體內的穩定性。研究中利用直線型(Linear)與 支鏈型(Branched)兩種不同型態的聚乙烯亞胺做為基因傳遞載體。 在直線型聚乙烯亞胺載體的測試中,高分子對核酸的包覆能力到 達85%左右,所形成的載體粒徑大小約在300-400nm 之間。載體的 穩定性測試顯示在白蛋白的環境下,載體在較高的N/P 值(陽離子莫 耳數/陰離子莫耳數)時會有明顯的聚集現象。而在血清的環境下,當 N/P=2 與6 時,載體會被血清分解,N/P=9 時能夠減緩血清帶來的分 實驗中以兩種不同分子量的葡萄聚糖對直線型聚乙烯亞胺載體 進行改質後,每分子聚乙烯亞胺平均帶有1~2 個分子的葡萄聚糖。以 白蛋白與血清對改質後的高分子載體進行測試,發現在白蛋白的環境 下,載體經過不同程度的改質皆會受到白蛋白的影響,使本身的粒徑 由於白蛋白的聚集而變大。此一聚集現象隨著N/P 的增加而降低。而 在血清的測試下,以分子量為10000 的葡萄聚糖改質的高分子載體, 受血清影響的程度隨著改質度增加而降低,當N/P 值越高,越能抗拒 血清的分解。以分子量1500 的葡萄聚糖對高分子載體進行改質,當 改質度增加,其對血清的抵抗能力會降低,且隨著N/P 值的增加,血 清對載體的分解效應越低。 在支鏈型聚乙烯亞胺載體的測試中,發現聚乙烯亞胺在N/P=2 時 可以完全將核酸包覆,而形成的粒徑大小在80-110nm 之間。以此載 體在模擬體內環境的測試中,發現載體在牛血清白蛋白中,白蛋白所 帶的電性使載體產生聚集,造成載體的粒徑變大,而在血清的測試 中,發現血清中所含的蛋白質將載體分解,造成核酸與高分子分離而 暴露在外面。 研究中進一步以葡萄聚糖對支鏈型聚乙烯亞胺作改質,並利用此 改質物與核酸形成載體,發現原本帶正電性的載體經過改質後,表面 的電性被改質成接近電中性的狀態,而所形成載體的粒徑在100- 120nm 之間。此載體在牛血清白蛋白與血清的測試中,白蛋白對載體 所造成的聚集現象獲得明顯改善,載體粒徑維持在100-130 nm 之間。 而在血清的測試中,以分子量為1500 的葡萄聚糖所改質的載體可以 減緩血清所造成的分解作用,增加載體的穩定性。zh_TW
dc.description.tableofcontents中文摘要............................................. I 英文摘要........................................... III 目錄.................................................. V 表目錄.............................................. VII 圖目錄............................................. VIII 圖目錄............................................. VIII 一、緒論.............................................. 1 1-1 前言..........................................................................................1 1-2 研究動機與目的..........................................................................2 二、文獻回顧與原理...................................... 4 2-1 質體基因的特性..........................................................................4 2-2 聚乙烯亞胺的性質......................................................................6 2-3 聚乙烯亞胺對核酸的包覆作用..................................................8 2-4 高分子載體的改質....................................................................10 2-5 載體對細胞的轉染機制............................................................11 2-6 測試載體穩定性的體內模擬環境............................................13 三、實驗............................................. 15 3-1 實驗藥品....................................................................................15 3-2 實驗儀器....................................................................................17 3-3 實驗方法....................................................................................19 3-3-1 核酸的製備.............................................................................19 3-3-2 高分子載體的製備.................................................................19 3-3-3 葡萄聚醣的接枝反應.............................................................20 3-3-4 體外穩定性的測試.................................................................21 3-3-5 載體粒徑與表面電荷的測定.................................................21 四、結果與討論......................................... 23 Part A 直線型聚乙烯亞胺載體的穩定性測試................ 23 4A-1 高分子載體的物理性質.........................................................23 4A-2 血清與蛋白質對載體的影響.................................................24 4A-3 直線型聚乙烯亞胺的改質反應.............................................26 4A-4 改質後的高分子載體之物理性質.........................................27 4A-5 血清與蛋白質對改質後載體的影響.....................................28 4A-5-1 以葡萄聚糖(Mw:10000)改質的聚乙烯亞胺......................28 4A-5-2 以葡萄聚糖(Mw:1500)改質的聚乙烯亞胺........................31 Part B 支鏈型聚乙烯亞胺載體的穩定性測試................ 34 4B-1 高分子載體的物理性質.........................................................34 4B-2 血清與蛋白質對載體的影響.................................................35 4B-3 支鏈型聚乙烯亞胺的改質反應.............................................36 4B-4 改質後的高分子載體之物理性質.........................................37 4B-5 血清與蛋白質對改質後載體的影響.....................................37 4B-5-1 以葡萄聚糖(Mw:10000)改質的聚乙烯亞胺......................37 4B-5-2 以葡萄聚糖(Mw:1500)改質的聚乙烯亞胺........................40 五、結論............................................. 43 參考文獻............................................ 44 表目錄............................................... 48 圖目錄............................................... 58 Part A 以直線型(Linear)聚乙烯亞胺載體為主的穩定性測試........59 Part B 以支鏈型(Branched)聚乙烯亞胺載體為主的穩定性測試...84zh_TW
dc.language.isozh_TWzh_TW
dc.publisher化學工程學系zh_TW
dc.subject葡萄聚糖zh_TW
dc.subject聚乙烯亞胺zh_TW
dc.title利用葡萄聚糖提升聚乙烯亞胺載體的穩定性zh_TW
dc.typeThesis and Dissertationzh_TW
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