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標題: Investigation of Rad23 Phosphorylation in the Regulation of Ubiquitin-Dependent Proteolysis and DNA Repair
磷酸化調控Rad23在核酸修補與蛋白質降解途徑之機制研究
作者: 莊秀美
關鍵字: Rad23
Rad23
生物科學類
Kin28 kinase
Ubiquitin
proteasome
DNA repair
Kin28 激.
蛋白質降解
核酸修補
蛋白.體
基礎研究
摘要: 蛋白質Rad23 N端含有一個類似UbL 區域,可以和proteasome結合。另外在C端含有二個UBA區域可和ubiquitin及連結上ubiquitin的蛋白質結合。Rad23在ubiquitin媒介的蛋白質降解功能上,在演化上自酵母菌至人類是相當保留的。但是細胞內的訊號傳遞路徑如何調節Rad23的功能,以及它的蛋白質降解功能在核酸修補所扮演的角色,至今仍不瞭解。初步結果顯示,激?Kin28可將Rad23磷酸化。磷32標定的胺基酸薄層液相層析顯示Kin28是在Ser, Thr及Tyr上將Rad23磷酸化。二維電泳及免疫分析顯示至少在體內有5-6 個位置會被磷酸化,而且Rad23 磷酸化會被生長階段及細胞週期所調控。本研究將針對特定位置的胺基酸進行置換,以期更深入探討Rad23 磷酸化在核酸修補、蛋白質降解及細胞變異所扮演的角色。使用NetPhos 2.0程式分析預測,有幾個位置極可能會被磷酸化。首先第一年將位於UBA2上的T354及位於UBA1上的T146置換成不可磷酸化的alanine,第二年將著重在S139, S138, S136, T131, S106,S104, S100, 及T94,這些胺基酸都介於UBL與UBA1之間的區域。第三年將把位於UbL上的S77, S73, S58, S54, S36, S34,及T23置換成alanine。將這些位置個別置換後,分別分析它?的磷酸化情形以確定那些胺基在體內是真正會被磷酸化。每一個帶有單一定位突變的蛋白質將會被分析其核酸修補、Rad4 結合能力、紫外線敏感性,以及蛋白質降解功能。更進一步地, 將分析磷酸化現象是否是細胞週期及外在逆境所調控。因Rad23 在核酸修補、細胞週期調控與蛋白質降解途徑扮演相當重要的角色,本研究可提供Rad23 在核酸修補與蛋白質降解二種功能之間的生化關係,及深入瞭解細胞如何調控Rad23 在核酸修補與ubiquitin 媒介的蛋白質降解。由於人類喪失Rad4-Rad23 複合物核酸修補功能會使皮膚細胞對紫外線敏感性大增進而導致皮膚癌。此研究對皮膚癌的成因與治療有進一步的貢獻。
URI: http://hdl.handle.net/11455/48477
其他識別: NSC95-2311-B005-014-MY3
文章連結: http://grbsearch.stpi.narl.org.tw/GRB/result.jsp?id=1295914&plan_no=NSC95-2311-B005-014-MY3&plan_year=95&projkey=PA9508-1345&target=plan&highStr=*&check=0&pnchDesc=%E7%A3%B7%E9%85%B8%E5%8C%96%E8%AA%BF%E6%8E%A7Rad23%E5%9C%A8%E6%A0%B8%E9%85%B8%E4%BF%AE%E8%A3%9C%E8%88%87%E8%9B%8B%E7%99%BD%E8%B3%AA%E9%99%8D%E8%A7%A3%E9%80%94%E5%BE%91%E4%B9%8B%E6%A9%9F%E5%88%B6%E7%A0%94%E7%A9%B6
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