Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/51509
標題: Studies on Cyclodextrin Glucanotransferase (IV) : Cloning and
環狀糊精葡萄糖■轉移■之研究(IV):Bacillus macerans 基因之選殖、
作者: 羅道文
Luor, Dauh-Wern
關鍵字: Cyclodextrin glucanotransferase
環狀糊精葡萄糖■基轉移■
Bacillus macerans
gene cloning
gene expression
Bacilus macerans
基因選殖
基因表現
出版社: 食品科學系
摘要: 本研究以 B. macerans 之 late log phase 染色體 DNA 為模板,利用聚 合■鏈反應(PCR)合成一段長度為2.1 kb, 但不具 signal sequence之 CGTase 基因。將該酵素基因選殖於具有 Lac 或 T7 啟動子之高表現載 體( pUC19 、pET3 、pTZ18U ) 後 , 並以 IPTG 誘生 CGTase 之生產 , 結果顯示 CGTase 雖能於 E. coli 體內生成, 但卻未能大量表現( overexpression)。由於 CGTase 於 E. coli 體內有明顯之降解現象,因 此我們認為此缺乏 signal peptide 之 CGTase 於 E. coli 體內並不穩 定。進一步以 β-CD 親合性管柱層析分離 E. coli 之 CGTase, 並研究 其特性, 結果顯示E. coli所生產之CGTase 和 B. macerans之CGTase 不 但具有相似之抗原性, 且均具有 CGTase 之催化活性(包括澱粉及CD之水 解 )。由此可見經 E. coli 生成之 CGTase和 B. macerans 之 CGTase性 質相同。因此, 本研究之系統亦可做為將來突變型( mutant ) CGTase之 生產及活性分析之研究依據。
URI: http://hdl.handle.net/11455/51509
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