Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/53680
標題: 應用Blue-Native PAGE與Patch-Clamp研究merA轉殖小球藻之重金屬運輸機制
Toward the Molecular Mechanisms of Heavy Metal Transport in Mera Transgenic Chlorella: Blue-Native Page and Patch Clamp Approach
作者: 簡麗鳳
關鍵字: 重金屬離子運輸
生物技術, 環保工程
merA 轉殖小球藻
葉綠素螢光
運輸蛋白
BN-PAGE
Patch-Clamp
基礎研究
摘要: 有些重金屬離子是生物體所必須的物質,因為這些重金屬離子參與體內許多生化反應,影響生長與發育。對微生物、藻類或植物而言,可經由水與土壤中吸收一些微量的必需重金屬離子。但許多工業廢棄物卻造成可怕的重金屬污染,經由植物或微生物的吸收與累積,經由食物鏈的傳播,間接造成人體的傷害。所以,解決水與土壤重金屬污染成為相當重要的課題。有鑑於此,我們以蘇力菌的merA 基因(其基因產物汞離子還原.能催化Hg2+還原成Hg0),轉入單細胞小球藻Chlorella sp DT,並成功篩選出可清除無機汞的merA 轉殖小球藻。但是意外發現這些merA 轉殖小球藻對其他的重金屬有不同的耐受性。雖然已知藻類或植物對二價重金屬鎘(Cd2+)、銅(Cu2+)、汞(Hg2+)、鉛(Pb2+)等較易吸收且積聚,但是這些重金屬離子吸收的途徑與積聚之機制卻不明瞭。因為不同物種,有不同的重金屬吸收途徑和不同的耐受性。為了期許merA 轉殖小球藻能協助土壤復育工作,我們希望建立merA 轉殖小球藻之重金屬運輸機制、重金屬誘導氧化壓力的調控、重金屬壓力逆境訊號傳遞之模式系統。本研究計畫將著重利用Blue-Native PAGE 分析重金屬運輸機制之運輸蛋白,並建立Patch-Clamp 測定離子運輸之電流電位關係模式:(1) 應用「葉綠素螢光」技術測定二價Cd2+、Cu2+、Hg2+、Pb2+等重金屬對小球藻「光合作用」之抑製作用,來評估其重金屬耐受性濃度。(2) 應用蛋白質體分析技術之「Blue-Native PAGE」,分析細胞膜上運輸蛋白組成,研究Cd2+、Cu2+、Hg2+、Pb2+等重金屬處理之後,可能參與其中或交互反應的運輸蛋白。(a) 首先,備製小球藻原生質體。(b) 再者,利用非離子性介面活性劑將膜蛋白溶解出來。(c)以一維凝膠電泳Blue-Native (BN) PAGE 或Colorless-Native (CN) PAGE 分離細胞膜蛋白,可利用酵素活性染色。續以二維凝膠電泳BN-PAGE 或SDS-PAGE 分析,用coomassieblue 或sliver stain 染色。(d) 比較其他藻類已知之細胞膜或其他胞器(例如液泡等)之運輸蛋白。(f) 評估其他離子運輸蛋白的交互作用。(3) 應用生物資訊。利用質譜儀(mass spectrometry)可作更詳細的蛋白質身份鑑定。應用生物資訊工具,比對運輸蛋白與已知基因序列的對應關係。(4) 建立Patch-Clamp 技術,測定單一細胞K+電流電位關係模式,再測定Cd2+、Cu2+、Hg2+、Pb2+等電流電位關係,以瞭解其運輸離子動力模式。
URI: http://hdl.handle.net/11455/53680
其他識別: NSC95-2313-B005-067
文章連結: http://grbsearch.stpi.narl.org.tw/GRB/result.jsp?id=1286669&plan_no=NSC95-2313-B005-067&plan_year=95&projkey=PD9508-0193&target=plan&highStr=*&check=0&pnchDesc=%E6%87%89%E7%94%A8Blue-Native+PAGE%E8%88%87Patch-Clamp%E7%A0%94%E7%A9%B6merA%E8%BD%89%E6%AE%96%E5%B0%8F%E7%90%83%E8%97%BB%E4%B9%8B%E9%87%8D%E9%87%91%E5%B1%AC%E9%81%8B%E8%BC%B8%E6%A9%9F%E5%88%B6
Appears in Collections:生命科學系所

文件中的檔案:

取得全文請前往華藝線上圖書館



Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.