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標題: 竹嵌紋病毒感染性 cDNA 的選殖及其複製機制的研究(II)
BaMV Infectious cDNA Construction and the Study of Its Replication(II)
作者: 蔡慶修
關鍵字: 基礎研究
Bamboo mosaic virus
生物技術
竹嵌紋病毒
核糖核酸三級結構
體外複製
RNA tertiary structure
in vitro replication
摘要: 竹嵌紋病毒 (Bamboo mosaic virus, BaMV) 為一曲形 柱狀植物病毒,含有單一正股 (positive strand) 核 醣核酸 (RNA).此一病毒除具地域性外,對台灣麻 竹及綠竹造成相當嚴重的危害.因此徹底了解 此病毒的危害機制實為解決此病害的根本之道 .合成及篩選具高度感染性的轉錄體 (high infectivity transcripts) 是為一切了解病毒在分子 生物學上的首要工具.有了此工具則能探討病 毒在寄主細胞內基因的表現及其複製時所需要 的訊息.除此之外,能建立生體外的複製系統亦 為了解病毒複製機制的另一種途徑.目前在台 灣林納生博士及徐堯煇博士已發表了竹嵌紋病 毒全長的核酸基因體序列,將其序列經由電腦的運算模擬分析,結果發現其 3'noncoding region 可以形成很特殊之三級結構,這種三級結構可 能與複製酵素複合體(replicase complex) 辨識結合 及核酸複製之起始有相關連.為了證明這一個 三級結構的存在,我們將建立一個病毒生體外 複製系統 (in vitro replication system) 來探討這個 3'noncoding region的三級結構存在的可能性.所謂 生體外的複製系統即是將整個病毒的複製酵素 複合體由感病的植株體內抽取出來,而所抽取 出之複製酵素複合體仍然具有複製病毒的活性 .在建立這個病毒體外複製系統的同時,我們亦 將針對所抽出之體外複製酵素複合體進行一連 串的生化反應測試.我們亦將對核酸三級結構 製造出一系列的突變種來做測試,以便更細部 的了解那一份的核酸結構是直接地參與複製酵 素複合體的結合,那一部份是間接地參與或無 任何的關連.胡瓜嵌紋病毒為一球形之植物病 毒,含有三段大小不同的單股正向核醣核酸基 因體.每一基因體最末端的部份約兩百個核 酸 左右則可以形成一個很特殊的三級結構,這個 三級結構被稱為 tRNA-likestructure,這種結構可以 和胺基酸化接合 結合而接連一個專一性的 tyrosine. 由相類似的病毒得知,這種三級結構是 病毒在植物寄主細胞內複製時所必須的訊息, 亦即這種三級結構可能即是病毒複製啟動子的 位置.然而對胡瓜嵌紋病毒的相類似研究,則付 之闕如. 由於胡瓜嵌紋病毒是世界性的,廣犯性的病毒,而對其複製機制的研究又不多,所以是 值得專研的題材.我們將建立一個病毒生體外 的複製系統來探討這個三級結構與複製之間的 關係.首先將從感病的煙草體內純化胡瓜嵌紋 病毒複製酵素複合體.再利用體外轉錄系統製 造出含有這個三級結構的轉錄體來作為複製複 合體的受質進行體外的複製.若這個三級結構 確實為病毒複製的啟動子,則經反應後,可以偵 測出具有放射性源�虳w之產物.一旦這個胡瓜 嵌紋病毒生體外複製系統建立完備,則可利用 這套系統來探討病毒複製時,第一個核 酸起始 的位置,得知這一個起始點的位置有利於了解 病毒核酸的複製機制的研究.
URI: http://hdl.handle.net/11455/62883
其他識別: NSC85-2311-B005-002-B11
文章連結: http://grbsearch.stpi.narl.org.tw/GRB/result.jsp?id=227544&plan_no=NSC85-2311-B005-002-B11&plan_year=85&projkey=PA8502-1350&target=plan&highStr=*&check=0&pnchDesc=%E7%AB%B9%E5%B5%8C%E7%B4%8B%E7%97%85%E6%AF%92%E6%84%9F%E6%9F%93%E6%80%A7+cDNA+%E7%9A%84%E9%81%B8%E6%AE%96%E5%8F%8A%E5%85%B6%E8%A4%87%E8%A3%BD%E6%A9%9F%E5%88%B6%E7%9A%84%E7%A0%94%E7%A9%B6%28II%29
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