Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/66297
標題: 研發巴氏桿菌毒素之DNA疫苗預防豬萎縮性鼻炎
Development of DNA vaccines of the Pasteurella multocida toxin against swine atrophic rhinitis
作者: 謝宇軒
關鍵字: 巴氏桿菌毒素
DNA疫苗
豬萎縮性鼻炎
真核表現質體
出版社: 獸醫微生物學研究所
摘要: Pasteurella multocida之PMT毒素蛋白分子量為146kDa,並已證實是造成豬萎縮性鼻炎的主因。目前D型產毒性Pasteurella multocida台灣分離株(Liu48)其PMT基因已被選殖、定序,並利用pET原核表現系統進行重組PMT次單位毒素蛋白之表現。為了進一步了解PMT毒素蛋白之病原性與抗原性,我們成功構築出四個真核表現質體分別包含毒素基因核酸編號216~1666(pcDNAPMT1)、核酸編號216~3168(pcDNAPMT4)、核酸編號1666~4058(pcDNAPMT5)與核酸編號3168~4058(pcDNAPMT7)之基因片段。經自動核酸定序分析確認其正確基因序列後,分別進行真核細胞轉染實驗,以抗PMT之免疫血清進行轉染細胞之免疫過氧化氫酵素染色的結果顯示,4株重組PMT真核表現質體皆能在L-M細胞內表現出PMT重組蛋白,並且能被抗PMT之免疫血清所辨識,而所表現之PMT重組蛋白也無法誘發被轉染細胞的細胞毒性。於是,我們便將此四株真核表現質體分別以100μg DNA/100μl PBS/mouse之劑量直接注射到小白鼠的脛骨肌中,爾後每隔2週各補強注射1次共計免疫3次,以評估PMT DNA疫苗之可行性並進行效能分析。實驗結果顯示在血清抗體力價測定中,分別免疫這4株重組PMT真核表現質體的小白鼠其抗體力價皆有明顯上升;而有趣的是只接種pcDNA3.1真核表現載體也能增強小白鼠的抗體免疫反應。而在小白鼠免疫後以PMT毒素進行攻毒試驗的結果顯示,各有1隻免疫pcDNAPMT1、pcDNAPMT4與pcDNAPMT5之小白鼠以及2隻免疫pcDNAPMT7之小白鼠能耐過5mg PMT毒素,並於攻毒後第四天逐漸消失其臨床症狀而恢復健康。綜合上述實驗結果顯示重組PMT DNA疫苗具有免疫保護效力之潛能。
URI: http://hdl.handle.net/11455/66297
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