Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/66511
標題: 利用Pichia pastoris大量合成獸醫有用蛋白
High Level Expression of Veterinary Medicinally Significant Proteins in Pichia pastoris
作者: 陳震漢
關鍵字: 應用研究
GST fusion protein
生物技術, 畜牧獸醫類
GST融合蛋白
載體
蛋白質合成
甲醇啟動
Vector
Protein synthesis
Methanol induction
Pichia pastoris
摘要: Pichia pastoris 近年來迅速地被發展成大量合成有用蛋白質的表現系統之一,它有一個受甲醇啟動的強啟動子,並有一系列表現載體被構築成功,此外,它有另一獨特之處,就是它很容易被擴展到發酵槽中生長,極適合以工業用等級的巨型發酵槽生產。根據主持人過去在Wellcome藥廠工作時,利用發酵槽培養Pichia pastoris、大量生產有用的醫用蛋白質的經驗,打算將Pichia pastoris 的表現系統在本實驗室建立起來。本年度計畫打算進行的載體改造工作,有兩個目的:第一、將抗藥基因(kanr)殖入載體,可藉由G418的篩選,增加得到高產菌株的機率;其次、由於某些有用的外來基因,既無有效的分析方法,又無抗體可用,為了便於這類有蛋白產物的選殖、追蹤、與純化,故而構築可供合成(His)6-tagged或GST fusion蛋白產物的載體;本校昆蟲系孫志寧教授實驗室從事小菜蛾glutathione S-transferase 的研究成果極為豐碩,其isozymes之一GST3,既有抗體可茲利用,又有簡便易行、且具受質特異性的酵素分析方法,實為一不可多得的本土性材料,本計畫打算利用孫教授實驗室最近分離得到的GST3 cDNAclone,經由PCR增殖此基因,殖入P. pastoris 的表現載體。利用構築成功的表現載體,本計畫打算將獸醫方面有用的基因殖入,並篩選外來基因成功插入P. pastoris 基因體的菌株,進行大量培養與蛋白質的表現,利用發酵槽,先以不含甲醇的培養基取得大量細胞,再加入適當的甲醇繼續培養,以啟動調控外來基因表現的AOX1基因啟動子。打算合成的蛋白質包括:豬假性狂犬病毒醣蛋白gp50、牛傳染性鼻氣管炎病毒(infectiousbovine rhinotracheitis virus, IBRV)感染寄主細胞過程中合成的兩個蛋白質,uracil-DNAglycosylase 以及dUTPase,前者具有開發為副單位疫苗的可能性,後兩者則具有作為藥物目標蛋白的潛力。
URI: http://hdl.handle.net/11455/66511
其他識別: NSC87-2313-B005-080
文章連結: http://grbsearch.stpi.narl.org.tw/GRB/result.jsp?id=343707&plan_no=NSC87-2313-B005-080&plan_year=87&projkey=PB8701-2212&target=plan&highStr=*&check=0&pnchDesc=%E5%88%A9%E7%94%A8Pichia+pastoris%E5%A4%A7%E9%87%8F%E5%90%88%E6%88%90%E7%8D%B8%E9%86%AB%E6%9C%89%E7%94%A8%E8%9B%8B%E7%99%BD
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