Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/13564
標題: 傳染性華氏囊病毒VP2基因之核酸定序及其表現
Nucleotide sequencing and expression of VP2 gene of infectious bursal disease virus
作者: 郁筱玲
YU, XIAO-LING
關鍵字: 華氏囊病毒;基因;核酸定序
出版社: 獸醫研究所
摘要: 
本實驗利用基因重組及核酸定序技術,分析傳染性華氏囊病毒(infectious bursal
disease virus ;簡稱IBDV) VP2 基因之核酸序列,並檢視該基因在大腸桿菌內表
現的情形。利用純化的 IBDV P3009 株病毒 RNA為模板及人工合成的病毒引子,進
行cDNA片段,將之作為cDNA的合成,結果得到長約3.4Kbp的單股cDNA片段,將作為
模板,加入 VP2基因兩端之相對人工合引子,進行聚合 連鎖反應(polymerase ch-
ain reaction, 簡稱PCR)大量增幅(amplifly) VP2基因片段。將所得長約1.7Kbp
的 VP2基因經限制 切割以及 chroma column純化後,嵌入質體 pUC18。經篩選後
,取一陽性株,以南方雜交試驗 (southern hybridization) 證實該重組株內含有
VP2 基因。
將 VP2基因次選殖至噬菌體 M13,進行核酸定序後,確定有所選殖的 VP2基內全長
為1674個核 酸5''端含轉譯起始密碼(ATG); 與國外STC、002-73、Cul、PBG98 以
及52/70 株之 VP2基因核酸序列分別有97.25、92.77、96.71、96.87及96.95%的同
源性 (homology)。在氨基酸序列方面則分別有96.90、96.36、97.27、97.36及97.
27%的同源性。
VP2 基因再被次選殖入表現載體pBLUESCRIPT Ⅱ KS+ 中,以大腸桿菌DH5 α 為宿
主細胞,利用IPTG誘發 VP2基因表現。最後將表現後的菌體溶解,以抗β-galact-
osidase 及抗 VP2蛋白質之單源抗體偵測,結果可測得含 IBDV VP2 的融合蛋白質

#9207864
#9207864
URI: http://hdl.handle.net/11455/13564
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