Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/13923
標題: 家禽流行性感冒病毒核蛋白之核酸序列分析與酵素連結免疫吸附分析(ELISA)套組之開發
Analysis of nucleotide sequences and development of ELISA kit for avian influenza virus nucleoprotein
作者: 陳亮丞
關鍵字: 家禽流行性感冒病毒核蛋白
出版社: 獸醫學系
摘要: 
因為核蛋白 (NP) 在A型流行性感冒病毒具有良好保留性且變異性遠比流行性感冒病毒表面醣蛋白來得慢,所以常使用於血清學診斷方面。因此本研究分析禽類15種H血清亞型NP基因開讀框之胺基酸序列,得知禽類15種H血清亞型轉譯出的NP胺基酸序列相似度大於95%,顯示NP蛋白在禽類15種H血清亞型間具有保留性。將A / Chicken / Taiwan / NCHU-0507 / 99 (H6N1) 毒株其NP基因開讀框使用E. coli表現系統表現,並使用於血清學診斷方面。E. coli表現之重組核蛋白 (rNP) 使用SDS-PAGE及西方轉漬法分析 (Western blot) 分析其表現狀況並以親和性樹脂管柱加以純化,以得到大量之純化rNP。所得之純化rNP使用於Western blot可檢測出15種H血清亞型之抗體,而將其使用於酵素連結免疫吸附法 (ELISA),也可檢測出15種H血清亞型之抗體。進一步檢測469隻田間雞隻血清及165隻實驗感染及非感染雞隻血清,以評估純化rNP使用於ELISA的表現性。並以血球凝集抑制試驗 (HI) 確認純化rNP使用於ELISA檢測結果之特異性。相對於膠體免疫擴散試驗 (AGID),純化rNP使用於ELISA之敏感性為100%及特異性為80.4%。而純化rNP使用於ELISA相對於HI之檢測結果一致性為94.8%。這些結果顯示純化rNP使用於ELISA與AGID具有高度之相關性且比AGID更具敏感性。相對於商品化ELISA套組,純化rNP使用於ELISA之敏感性為99.6%及特異性為90.4%。結果顯示純化rNP使用於ELISA與商品化ELISA套組一樣具有良好之表現性。所以使用純化rNP並使用於ELISA可發展建立為高敏感性及特異性且達到快速檢測大量雞隻家禽流行性感冒抗體樣品的血清學診斷技術。
URI: http://hdl.handle.net/11455/13923
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