Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/14014
DC FieldValueLanguage
dc.contributor.advisor沈瑞鴻zh_TW
dc.contributor.author徐正光zh_TW
dc.date2003zh_TW
dc.date.accessioned2014-06-06T06:51:34Z-
dc.date.available2014-06-06T06:51:34Z-
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11455/14014-
dc.description.abstract兔病毒性出血症 (Rabbit haemorrhagic disease;RHD) 為急性的兔隻病毒性疾病,因成兔感染兔病毒性出血症病毒 (Rabbit haemorrhagic disease virus;RHDV) 所引起。此疾病之特徵為傳染性高,可藉由直接和間接傳染途徑迅速散播病原,與高死亡率 (80-100%)。台灣病例於1994年由呂榮修博士首先發現,之後陸續仍有零星疫情發生。本研究收集自1994至2002年間台灣地區七個RHDV分離株,分別進行病毒增殖後,以氯化銫 (CsCl) 梯度離心純化病毒並萃取其核酸,採用RT-PCR增幅capsid protein (VP60) 核酸片段約1.74 kb,經由此片段的核酸定序與分析結果,台灣RHDV分離株的核酸序列有92.5-99.8 %的相似性,且分離株之間可分為兩個主要族群,這兩族群在演化分析上皆與德國分離株極為接近。RHD已存在台灣近十年時間,為了尋找那一RHDV分離株,可提供最好的免疫能力,保護兔群免於其他分離株的攻擊,所以先將不同的分離株,製作成十倍肝臟乳劑,離心後收取上清液,加入福馬林完成不活化臟器疫苗之製作。首先,進行各株不活化臟器疫苗的免疫試驗,並經由血球凝集抑制試驗、酵素結合免疫吸附分析法和西方轉漬法測試免疫後3週內之抗體反應;結果顯示,各個RHDV分離株的不活化臟器疫苗,所提供的免疫能力相似,且免疫的兔隻並無死亡的情形。進一步再以1994、2002年兩株RHDV的不活化臟器疫苗,進行交叉保護試驗,並以同樣方法檢測免疫與攻毒後的抗體爬升;結果顯示,此兩個分離株之間具有交叉保護能力。經由這一連串的實驗,我們得到的結論,自1994至2002年台灣地區的RHDV分離株,可分為兩個族群,各分離株核酸序列有0.2-7.5 % 差異性,而且不同的分離株製成的不活化臟器疫苗,能提供相似的保護能力,免於相同或相異毒株的感染,所以在台灣,不論施打那一分離株所製得的疫苗,在田間仍是預防此疾病可行之措施。zh_TW
dc.description.tableofcontents中文摘要.....................................................Ⅰ Abstract.....................................................Ⅱ 目次.........................................................Ⅲ表次.........................................................Ⅳ 圖次.........................................................Ⅴ 第一章 緒言................................................1 第二章 文獻探討............................................2 第一節 歷史背景............................................2 第二節 病毒的分類..........................................2 2-2.1 RHDV的歸屬..........................................3 2-2.2 無致病性 (nonpathogenic) 分離株的出現...............3 第三節 病毒的特色..........................................4 2-3.1 病毒的形態..........................................4 2-3.2 基因體結構..........................................4 2-3.3 生物學特性..........................................6 2-3.4 培養及增殖特性......................................6 2-3.5 親和細胞............................................7 2-5.6 病毒耐受性..........................................8 第四節 致病機轉............................................8 第五節 流行病學............................................9 第六節 傳染途徑............................................9 第七節 疾病特徵...........................................10 2-7.1 臨床症狀...........................................10 2-7.2 病理變化….........................................11 2-7.3 組織病理學病變.....................................11 第八節 診斷方法...........................................12 第九節 治療及預防.........................................13 2-9.1 治療與處置.........................................13 2-9.2 臟器不活化疫苗的施行...............................13 2-9.3 接種時機...........................................14 2-9.3 疫苗的未來展望.....................................14 第三章 材料與方法.........................................15 第一節 病毒之選擇、增殖與純化及其力價之檢測...............15 3-1.1 病毒株之選擇.......................................15 3-1.2 實驗動物…………….................................15 3-1.3 野外病毒分離及增殖.................................15 3-1.4 病毒之力價.........................................15 3-1.5 病毒之純化.........................................16 3-1.6 病毒之確定.........................................16 第二節 病毒之序列分析.....................................17 3-2.1 病毒核酸之萃取.....................................17 3-2.2 反轉錄聚合酵素連鎖反應之初步確定...................18 3-2.3 使用引子設計.......................................18 3-2.4 反轉錄聚合酵素連鎖反應 (RT-PCR) ...................18 3-2.5 RT-PCR產物之偵測...................................19 3-2.6 純化RT-PCR產物.....................................19 3-2.7 定序RT-PCR產物.....................................20 3-2.8 核酸序列之分析...................................20 3-2.9 胺基酸序列比對及親緣樹分析.........................21 第三節 不活化疫苗之製作...................................21 3-3.1 不活化病毒株之選擇.................................21 3-3.2 病毒之不活化.......................................21 3-3.3 雜菌檢測與不活化病毒之確定.........................21 3-3.4 不活化疫苗之劑量...................................22 3-3.5 高度免疫血清之製備.................................22 第四節 免疫試驗...........................................22 3-4.1 免疫計劃...........................................22 3-4.2 攻毒試驗...........................................23 第五節 交叉保護能力試驗...................................23 3-5.1 交叉保護病毒株之選擇...............................23 3-5.2 免疫計劃...........................................23 3-5.3 交叉攻毒試驗.......................................23 第六節 免疫及交叉保護試驗之抗體力價測定...................24 3-6.1 血球凝集抑制試驗 (HIT) ............................24 3-6.2 酵素結合免疫吸附分析法 (ELISA ) ...................25 3-6.3 西方轉漬法 (Multi-screen channel) .................25 第四章 結果...............................................26 第一節 病毒之純化及力價確定...............................26 4-1.1 病毒之力價分析.....................................26 4-1.2 病毒純化...........................................26 4-1.3 病毒之確定結果.....................................26 第二節 病毒之序列分析結果.................................27 4-2.1 病毒核酸之萃取確認...............................27 4-2.2 RT-PCR產物之確認...................................27 4-2.3 VP60基因定序與親緣樹圖結果分析.....................27 4-2.4 VP60的胺基酸序列比對及親緣樹分析...................28 第三節 不活化疫苗之製作結果...............................29 4-3.1 雜菌檢測與不活化病毒之確定.........................29 4-3.2 不活化疫苗之劑量...................................29 第四節 免疫試驗之抗體反應.................................29 4-4.1 以HI檢測抗體反應...................................29 4-4.2 以ELISA分析抗體反應................................30 4-4.3 以西方轉漬法 (Multi-screen channel) 分析抗體反應...30 4-4.4 免疫試驗保護能力之確定.............................30 第五節 交叉保護能力試驗抗體反應...........................31 4-5.1 以HI檢測抗體反應...................................31 4-5.2 以ELISA分析抗體反應................................31 4-5.3 以西方轉漬法 (Multi-screen channel) 分析抗體反應...31 4-5.4 交叉保護能力試驗之結果.............................32 第五章 討論...............................................53 參考文獻 ...................................................58 附錄一 比對台灣RHDV分離株之VP60基因核酸序列之差異.......71 附錄二 比對台灣RHDV分離株之VP60基因胺基酸序列之差異.......74 附錄三 台灣與世界其他地區RHDV分離株之VP60基因核酸序列之差 異.................................................75 附錄四 台灣與世界其他地區RHDV分離株之VP60基因胺基酸序列之差 異.................................................85zh_TW
dc.language.isoen_USzh_TW
dc.publisher獸醫學系zh_TW
dc.subject兔病毒性出血症病毒zh_TW
dc.subject不活化疫苗zh_TW
dc.title台灣兔病毒性出血症病毒之序列分析與不活化疫苗之評估zh_TW
dc.titleStudies on the Nucleotide Sequence and Evaluation of an Inactivated Vaccine of Rabbit Haemorrhagic Disease Virus in Taiwanen_US
dc.typeThesis and Dissertationzh_TW
item.languageiso639-1en_US-
item.openairetypeThesis and Dissertation-
item.cerifentitytypePublications-
item.grantfulltextnone-
item.fulltextno fulltext-
item.openairecristypehttp://purl.org/coar/resource_type/c_18cf-
Appears in Collections:獸醫學系所
Show simple item record
 
TAIR Related Article

Google ScholarTM

Check


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.