以間接螢光染色法檢測鴨及鵝小病毒抗原抗體之研究

Abstract

鴨/鵝小病毒先後於1982年及1989年在台灣爆發重大疫情，除了會引起幼禽的高死亡率外，還會導致水禽發育生長緩慢，造成經濟上嚴重的損失。由於缺乏無特定病原的鴨或鵝胚胎可供抗原的增殖來源，加上其組織培養上細胞病變效應現象不易觀察，所以研究本病存在某些困難度。因此，本實驗主要在自行製備兔抗鴨/鵝之免疫球蛋白之螢光標示抗體 (FITC labelled rabbit anti duck/goose immunoglobin)，並將應用至小病毒抗原抗體之檢測上。在標示抗體方面，將純化後的鴨/鵝免疫球蛋白加入佐劑，經多次免疫家兔以製備高度免疫血清；由兔抗鴨/鵝的高免血清純化出免疫球蛋白，並以FITC加以標示後，經Sephadex G-25及DEAE-cellulose純化出含有FITC標示之抗體。經標示有FITC的抗體，作為二次抗體使用，應用於間接螢光染色法 (indirect fluorescence assay；IFA) 檢測人工免疫之鴨及鵝血清，於免疫後3至5週內，抗體有明顯上升之趨勢。接著，應用IFA檢測水禽小病毒污染情形。結果發現，南部地區 (高雄、屏東) 飼養場檢測鴨/鵝小病毒抗體陽性率 (IFA抗體≧80)高於北部及中部地區；且一年之中的4-7月份血清抗體力價明顯比9-12月所測得值較高。另一方面，以肌肉注射方式給予每隻正蕃鴨106 TCID50 鵝小病毒疫苗株，以聚合酶連鎖反應 (polymerase chain reaction；PCR) 定期檢測病毒分布，於注射後24小時，即可於脾臟偵測出病毒核酸的存在，心、肝、脾、腎、華氏囊則於接種後3日檢測出呈陽性反應，而小腸則於接種後5日可見。另外臟器冷凍切片以IFA進行檢測結果；於接種後3日於華氏囊濾泡髓質部見到病毒顆粒，而脾臟、小腸黏膜下方腺窩處分別於接種後5日及9日見到病毒的特異性螢光。由上述結果顯示，PCR於接種後24小時即能檢測出病毒的存在，其敏感性明顯優於IFA檢測法，而IFA雖然敏感性不及PCR技術，但其檢測乃採用直接觀察臟器內的病毒分布位置，較PCR能避免偽陽性的發生，所以兩者皆是診斷鴨鵝小病毒感染症的重要檢測技術。