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dc.contributor.advisor鍾婷婷zh_TW
dc.contributor.advisorTing-Ting Jongen_US
dc.contributor.author黃國軒zh_TW
dc.contributor.authorHuang, Kuo-Hsuanen_US
dc.date2005zh_TW
dc.date.accessioned2014-06-06T06:54:28Z-
dc.date.available2014-06-06T06:54:28Z-
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11455/15746-
dc.description.abstract本研究共分為兩部分,第一部分主要是探討利用液相層析質譜儀之電灑游離法正離子(LC-ESI(+)-MS/MS-SRM)模式來分離偵測八種丹參藥材中之指標成分丹酚酸B及丹參酮I的定量分析;第二部分主要是探討利用液相層析質譜儀之電灑游離法正離子(LC-ESI(+)-MS/MS full scan)模式來定性偵測丹參中主要之丹參酮。 在第一部分的研究中,實驗所得為丹酚酸B之線性範圍為56至2000 ng/mL,線性相關係數(R2)為0.9992,偵測極限為24 ng/mL;丹參酮I線性範圍為56至2000 ng/mL,線性相關係數(R2)為0.9979,偵測極限為39 ng/mL。丹酚酸B回收率為83.8-96.0%;丹參酮I回收率為86.8-93.9%。在萃取方式的比較可以發現利用熱水萃取可得到較多的丹酚酸B,而利用70%甲醇熱壓溶劑萃取可得到較多的丹參酮I。兩種川丹參丹參酮I的含量比雲南丹參高,而且,生長時間越長,丹參酮I的含量越高。 在第二部分的研究中,利用電灑游離法正離子模式,來對於丹參中五種主要丹參酮作定性研究,以[M+H]+為母離子分析,結果得到這五種丹參酮皆有[M+H-18]+、[M+H-28]+及[M+H-46]+之特定斷裂碎片。在真實樣品的分析,發現除了這五種丹參酮外,另有三種丹參酮具有相同的斷裂模式。zh_TW
dc.description.tableofcontents【目錄】 目錄..................................................Ⅰ 圖目錄................................................Ⅶ 表目錄...............................................ⅩⅡ 謝誌.................................................ⅩⅣ 摘要.................................................ⅩⅥ 第一章 序論........................................1 一、前言...........................................1 二、中藥丹參藥材之簡介...............................2 三、丹參之藥理活性..................................8 四、研究動機........................................9 五、中藥材之分析方法................................10 (一)分析方法簡介...................................10 (二)分析上的困難...................................14 (1)基質干擾.......................................14 (2)分析物鑑定.....................................14 (3)改善辦法.......................................15 (三) 液相層析質譜儀簡介.............................16 (1)電灑游離法原理與介紹..........................16 (2)大氣壓化學游離法原理與介紹.....................18 (3)離子阱質量分析器之介紹.........................20 第二章 中藥丹參中指標成分丹酚酸B及丹參酮I含量測定.......26 第一節 實驗與分法...................................26 一、標準樣品部分....................................26 二、校正曲線溶液之製備...............................26 三、真實樣品之萃取與製備部分..........................27 (1) 超音波70% Methanol萃取..........................27 (2) 熱水萃取........................................29 (3) 熱壓70% Methanol萃取............................31 (4) 熱壓水萃取......................................33 四、儀器與設備.......................................35 五、實驗藥品.........................................37 六、液相層析質譜儀之實驗部份...........................40 (一) 電灑游離法(ESI)分析.............................40 (1) 離子偵測........................................40 (2) 斷裂離子分析 ....................................40 (3) 定量離子之掃描模式 ...............................41 (4) 流動注入分析與質譜條件最佳化 ......................41 (5) 層析條件探討 ....................................42 (二) 電灑游離法液相層析質譜儀(LC-ESI-MS/MS)分析.......43 (1) 質譜儀參數的最佳化................................43 (2) 層析條件 ........................................48 (3) 液相層析質譜儀最佳化條件 ..........................49 第二節 結果與討論....................................51 一、電灑游離法液相層析質譜術分析........................51 (1) 丹酚酸B之質譜特性.................................51 (2) 丹參酮I之質譜特性.................................53 (3) 咖啡酸之質譜特性..................................54 二、以LC-ESI-MS/MS 分析丹酚酸B與丹參酮I之檢量線測定......56 三、以LC-ESI-MS/MS分析丹酚酸B與丹參酮I之精密度..........59 四、真實樣品的測定部分.................................60 五、準確度分析........................................66 第三節 結論..........................................68 第三章 中藥丹參中丹參酮之定性研究........................70 第一節 實驗與分析方法..................................70 一、標準樣品部分.......................................70 二、真實樣品之萃取與製備部分............................71 三、儀器與設備.........................................73 四、實驗藥品...........................................75 五、液相層析質譜儀之實驗部份.............................77 (一)、電灑游離法分析....................................77 (1) 離子偵測...........................................77 (2) 斷裂離子分析.......................................77 (3) 流動注入分析與質譜條件最佳化.........................77 (4) 層析條件探討.......................................78 (二)、電灑游離法液相層析質譜術分析........................79 (1) 質譜儀參數的最佳化..................................79 (2) 層析條件...........................................81 (3) 液相層析質譜儀條件..................................82 第二節 結果與討論......................................85 一、電灑游離法液相層析質譜術分析..........................85 (1) 丹參酮ⅡA之質譜特性.................................85 (2) 隱丹參酮之質譜特性..................................87 (3) 丹參酮I之質譜特性...................................89 (4) 二氫丹參酮I之質譜特性...............................91 (5) 亞甲基丹參醌之質譜特性..............................93 二、利用液相層析質譜儀對於真實樣品之定性分析...............95 第三節 結論..........................................106 參考文獻..............................................107 【圖次】 圖1-1 脂溶性的丹參酮化合物..............................4 圖1-2 水溶性的酚酸類化合物..............................6 圖1-3 最早發表之液相層析質譜儀之電灑游離法介面裝置圖.......17 圖1-4 電灑游離法 (ESI) 離子化過程 (正離子模式)...........18 圖1-5 最早發表之液相層析質譜儀之大氣壓化學游離法 (APCI)介面裝置圖...................................................19 圖1-6 大氣壓化學游離法 (APCI) 離子化過程(正離子模式)......20 圖1-7 離子阱分析器剖面圖................................22 圖1-8 離子偵測系統剖面圖 (包括 Electro Multipier Conversion Dynode) ..............................................23 圖2-1 超音波70% Methanol萃取流程圖......................28 圖2-2 沸水水浴3小時萃取流程圖............................30 圖2-3 熱壓70% Methanol萃取流程圖........................32 圖2-4 熱壓水萃取流程圖..................................34 圖2-5 熱壓溶劑萃取裝置..................................36 圖2-6 標準品之結構:(a) salvianolic acid B (b) tanshinone I (c) caffeic acid......................................39 圖2-7 不同添加劑對訊號強度之比較..........................42 圖2-8 不同(a)霧化氣體流速(b) 輔助氣體流速(c) 噴灑電壓 (d) 不同毛細管溫度下對丹酚酸B訊號強度之比較....................................45 圖2-9 不同 (a) 霧化氣體流速 (b) 輔助氣體流速 (c) 噴灑電壓對丹參酮I訊號強度之比較...................................................46 圖2-10不同 (a) 霧化氣體流速 (b) 輔助氣體流速 (c) 噴灑電壓對咖啡酸訊號強度之比較.....................................................47 圖2-11 定量分析實驗所採用之梯度沖提條件....................48 圖2-12以注射針幫浦直接連續進樣分析之丹酚酸B (Salvianolic acid B)ESI-MS質譜圖.....................................................52 圖2-13 丹酚酸B之base peak m/z=741之MS/MS斷裂質譜圖........52 圖2-14以注射針幫浦直接連續進樣分析之丹參酮I (Tanshinone I) ESI-MS質譜圖.....................................................53 圖2-15丹參酮I之base peak m/z=277之MS/MS斷裂質譜圖.........54 圖2-16以注射針幫浦直接連續進樣分析之咖啡酸(Caffeic acid) ESI-LC/MS質譜圖......................................................55 圖2-17咖啡酸之base peak m/z=181之MS/MS斷裂質譜圖...........55 圖2-18 標準品經LC-ESI(+)-MS/MS SRM分析之層析圖(a) TIC (b) caffeic acid (c) salvianolic acid B(d) tanshinone I.............56 圖2-19丹酚酸B配置於雲南丹參基質之檢量線.....................57 圖2-20 丹參酮I配置於雲南丹參基質之檢量線....................57 圖2-21 川丹參經LC-ESI(+)-MS/MS SRM分析之層析圖(a) TIC (b) caffeic acid (c) salvianolic acid B (d) tanshinone I.................61 圖3-1定性分析實驗所用之萃取流程 ............................72 圖3-2 標準品之結構:(a) tanshinone IIA (b) cryptotanshinone (c) methylenetanshinquinone (d) dihydrotanshinone...........76 圖3-3 不同(a)霧化氣體流速 (b)輔助氣體流速 (c) 噴灑電壓 (d)毛細管溫度下對丹參酮IIA訊號強度之比較.......................................80 圖3-4 定性分析實驗所採用之梯度沖提條件.......................81 圖3-5以注射針幫浦直接連續進樣分析之丹參酮ⅡA (Tanshinone ⅡA) ESI-LC/MS質譜圖.......................................................86 圖3-6丹參酮ⅡA base peak m/z=295 之MS/MS斷裂質譜圖.........86 圖3-7以注射針幫浦直接連續進樣分析之隱丹參酮 (Cyptotanshinone) ESI-LC/MS質譜圖.......................................................88 圖3-8隱丹參酮 base peak m/z=297之MS/MS斷裂質譜圖..........88 圖3-9以注射針幫浦直接連續進樣分析之丹參酮I (Tanshinone I) ESI-LC/MS質譜圖.......................................................90 圖3-10丹參酮I之 base peak m/z=277之MS/MS斷裂質譜圖..........90 圖3-11以注射針幫浦直接連續進樣分析之二氫丹參酮I (dihydrotanshinone I) ESI-LC/MS質譜圖...............................................92 圖3-12二氫丹參酮I base peak m/z=279 之MS/MS斷裂質譜圖.....92 圖3-13 以注射針幫浦直接連續進樣分析之亞甲基丹參醌 (methylenetanshinquinone) ESI-LC/MS質譜圖................94 圖3-14亞甲基丹參醌base peak m/z=279之MS/MS斷裂質譜圖........94 圖3-15 丹參酮IIA標準品溶液注入液相層析質譜儀分析 (MS/MS full scan) 之層析圖.......................................................96 圖3-16 隱丹參酮標準品溶液注入液相層析質譜儀分析 (MS/MS full scan) 之層析圖.......................................................96 圖3-17丹參酮I標準品溶液注入液相層析質譜儀分析 (MS/MS full scan) 之層析圖.......................................................97 圖3-18二氫丹參酮I標準品溶液注入液相層析質譜儀分析 (MS/MS full scan) 之層析圖.......................................................97 圖3-19亞甲基丹參醌標準品溶液注入液相層析質譜儀分析 (MS/MS full scan) 之層析圖.......................................................98 圖3-20 川丹參真實樣品注入液相層析質譜儀分析 (MS full scan) 之層析圖.......................................................100 圖3-21 川丹參真實樣品注入液相層析質譜儀分析(MS/MS full scan)之層析圖.......................................................101 圖3-22 tanshinone IIB 之結構..............................103 圖3-23 (a) dehydromiltirone (b) dehydrotanshinquinone (c) tanshinquinone B.....................................104 圖3-24 (a) miltirone (b) tanshinquinone..................105 【表次】 表2-1 八種丹參樣品........................................38 表2-2 定量實驗液相層析質譜儀之最佳化參數.....................49 表2-3 定量實驗所採用之三種segment、三種scan event之設定值....50 表2-4 以LC-ESI (+)-MS/MS SRM模式分析丹酚酸B及丹參酮 I之線性範圍、線性方程式、線性相關係數及偵測極限................58 表2-5 利用液相層析質譜儀偵測丹酚酸B及丹參酮I之精密度...........59 表2-6 利用液相層析質譜儀偵測8種丹參單方中藥材以70% Methanol超音波萃取丹酚酸B及丹參酮I之分析結果........................................62 表2-7 利用液相層析質譜儀偵測8種丹參單方中藥材以熱水萃取時丹酚酸B及丹參酮I之分析結果.....................................................63 表2-8 利用液相層析質譜儀偵測8種丹參單方中藥材以70% Methanol熱壓溶劑萃取時丹酚酸B及丹參酮I之分析結果.....................................64 表2-9 利用液相層析質譜儀偵測8種丹參單方中藥材以熱壓水萃取時丹酚酸B及丹參酮I之分析結果....................................................65 表3-7 丹酚酸B準確度研究 ....................................66 表3-8 丹參酮I準確度研究.....................................67 表3-1定性實驗液相層析質譜儀之最佳化參數........................82 表3-2 定性實驗所採用之八種segment、八種scan event之設定值......83 表3-3 5種丹參酮標準品之滯留時間與質譜特性 .....................99 表3-4 MS full scan及MS/MS full scan各層析峰之訊號...........102zh_TW
dc.language.isoen_USzh_TW
dc.publisher化學系zh_TW
dc.subjectHPLC-ESI-MS/MSen_US
dc.subject液相層析質譜儀zh_TW
dc.subjectSalvia miltiorrhizaen_US
dc.subject丹參zh_TW
dc.title利用液相層析質譜儀(LC-MS/MS)對中藥材丹參中之有效成分作定性與定量研究zh_TW
dc.titleUsing HPLC-ESI-MS/MS in quantitative determination of salvianolic acid B, tanshinone I, and qualitative determination of several tanshinones in roots of Salvia species.en_US
dc.typeThesis and Dissertationzh_TW
item.languageiso639-1en_US-
item.fulltextno fulltext-
item.openairecristypehttp://purl.org/coar/resource_type/c_18cf-
item.grantfulltextnone-
item.cerifentitytypePublications-
item.openairetypeThesis and Dissertation-
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