水稻白葉枯病病原菌解磷 之解析與部份純化

Abstract

根據本實驗室之觀察發現水稻白葉枯病病原菌, 在non-mucoid mutant 1305, 1308中 其解磷 之活性較野生型604 高約10倍。又根據Sutherland對EPS 合成路經之模式及 Glaser解磷 對GCL-Sugar 之催化分解之報告, 吾人推測EPS 之合成, 可能受解磷 之調節。因而進行本研究, 將解磷 予以純化, 以便作更進一步之探討, 首先在實驗 中得知不但以完整之細胞可測得解磷 之活性, 且以滲透震撼或圓胞質體處理後亦均 可釋出約75∼85% 之解磷 活性, 而細胞內酵素之蔗糖分解 則仍留於細胞膜內, 因 而了解磷 為一存在於peirplasmic space 中之酵素, 解磷 之含量在不同之生長階 段以及不同含量磷 培養中均維持一定之範圍, 故知為構成性酵素。當以滲透震撼處 理之酵素抽出液進行電泳分析時可得3∼5條具解磷 活性之棕色帶, 且在DEAE-cell- ulose 柱層分析中亦得類似解磷 之三個部份。進一步之純化時此解磷 在Sephadex G200 中可分成四個不同之部份,分別各之為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲa、Ⅲb。再以CM-cellulose柱 層分析後確定此四種解磷 已完全分開, 而無混雜, 以此等部分純化之解磷 測定其 性質得知Ⅰ、Ⅱ、Ⅲa、Ⅲb之反應最適溫度分別為 50℃、50℃、50℃,及40℃, 其反 應最適PH分別為6.0、6.5、4.5、8.0。本研究並曾比較其離子效應, 受質專一性,Km 等性質。綜合現有數據推測Ⅰ、Ⅱ、Ⅲa、Ⅲb之四種解磷 分別為nonspecifir acid phosphetase, nucleotidase, acid phosphatase, 以及alpalin phosphatase。