Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/21363
標題: Sequence Analysis of Plasmid pXV64 of Xanthomonas campestris pv. vesicatoria
茄科斑點病菌之質體 pXV64 之定序與分析
作者: 范育芬
Fan, Yu-Fen
關鍵字: Filamentous phage;線狀噬菌體;topoisomerase;rolling-circle replication;拓樸酵素;環形複製
出版社: 分子生物研究所
摘要: 
Xv64 含一迷你質體, 命名為 pXV64. 定序結果顯示全長為 1851 bp.經分
析發現有三個 open reading frames. ORF1 與感染大腸桿菌之線狀噬菌
體 I2-2 之 Gene II 有很高的同質性. Gene II 是一種 nuclease-
topoisomerase, 促使 RF-DNA 產生單股的 nick 後以 rolling circle
的方式形成單股 DNA. maxicell 結果顯示有一新生成的蛋白質約 42
kD, 推測為 ORF1 在大腸桿菌 LCD44 中表現的產物. 將 Kmr 基因嵌入
pXV64 之 PstI 與 XhoII sites 均不影響質體之複製, 所生成之衍生質
體分別命名為 p64PK 及 p64XK. 此二衍生質體且可穩定存活於 Xv 及
Xc17 中. 但無法得到 Kmr 插入於 SalI 之衍生質體. 推測 SalI附近的
序列在 replication origin 中. 由 DNA 刪減結果顯示刪除 pXV64
base 1254 至 base 1572 之序列亦即相當於 ORF3 N-端 2/3 並不影響複
製. 將縮減質體 p64PK-1 上帶有 intergenic region 及 Kmr 之 DNA 片
段自行粘接後送入 Xc17 中無法得到轉形株, 但若 in trans 提供 ORF1
則可進行複製. 推測 pXV64 複製至少需要 ori 及 ORF1 之 functional
region. pXV64 無法在 JM103y 及 Pseudomonas fluorescence A002 中
存活, 可能是窄寄主質體. 以 pXV64 ori 及 ORF1 區域為探子分別進行
南方雜配顯示 Xv15 及 Xv30 迷你質體之 DNA 序列與 pXV64 有同質性.
URI: http://hdl.handle.net/11455/21363
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