木黴菌屬 (Trichoderma spp. )原生質體之製備及再生

Abstract

欲以原生質體做為實驗工具, 首要條件即在於如何有效獲得大量且具有生物活性的原 生質體。本論文主題係以植物防治菌木黴菌屬 (Trichoderma)中兩種真菌, Trichod- erma harzianum Rifai (TVCNI)和T.Koningii Oudem. (T12) 為材料, 探討其原生質 體之分離與培養技術o 實驗結果發現, TVCNI 和T12 有效產生大量原生質體之條件大致相同, 均是: 將培養 20小時的幼齡菌絲懸浮在31℃, 含有細胞壁分解酵素Novozym 234(15mg/ml),0.6M suc-rose,pH5.6,0.02M citrate phosphate buffer 中, 可獲致分別為6╳107 prot- opla sts/ml、1.2╳108 protoplasts/ml之原生質體產量。當再生培養基含1.5%(W/ V) yeast extract、1l Mandel''s salts(pH5.6)和0.8M glu-cose 時,TVCNI和T12 均 可獲致較高之再生率, 分別為35-54%、56-76%。TVCNI 與T12再生過程相近,均可分為 三種模式:(1)先形成成串的發芽細胞, 再長出菌絲; (2) 形成成串的發芽細胞, 但不 長出菌絲; (3) 菌絲直接由原生質體長出。