Preparation and Characterization of the Monoclonal Antibody to Serogroup Y Neisseria meningitidis

Abstract

奈瑟氏腦膜炎球菌 (Neisseria meningitidis) 是一種具有多醣莢膜的革籣氏陰性球菌。根據莢膜多醣的化學組成，腦膜炎球菌可分為12個血清群 (Serogroups)，其中 A、B、C、Y 及 W-135 五群為重要的人類病源菌，能引起腦脊髓膜炎與腦膜炎球菌菌血症。另外，根據外膜蛋白之抗原性的差異可分為不同的血清型以及副血清型。本研究的主要目的是製備對血清群Y腦膜炎球菌具有辨識能力的單株抗體，並從中找出具有補體依靠殺菌活性 (complement dependent bactericidal activity) 之抗體，進行進一步之分析，希望能找出此類抗體之抗原表位，作為研發腦膜炎球菌疫苗之根據。本研究從融合瘤細胞的製備中陸續地分離出8株抗腦膜炎球菌 GpYⅡ 之單株抗體。由 ELISA 分析以及西方轉漬分析結果推測 mAb 18-205可能是辨識到非蛋白抗原；mAb 23-08 是屬於 polyreactive natural autoantibodies (NAA)；mAb 12-01 可能是辨識到class Ⅳ 外膜蛋白。在八株單株抗體中只有 mAb 210-06 具有良好之補體依靠殺菌活性。綜合西方轉漬分析、蛋白質譜分析及重組基因分析結果，確定 mAb 210-06 所結合的抗原為腦膜炎球菌的 class Ⅰ 外膜蛋白 PorA。利用噬菌體展示技術、PorA序列分析及副血清型分析結果，定出 mAb 210-06 所辨識之 PorA 區域為 P1.2 副血清型的VR2 序列 (HFVQQTPKSQPTLVP)，其結合位置包含 QTPK 片段，其中第三個位置的胺基酸可能不參與和抗體的直接結合。另外，本研究也以 pET21 的表現系統建立了腦膜炎球菌之 PorA 蛋白在 E. coli 中的表現，對於 PorA 蛋白的進一步研究將會有所助益。