Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/21539
標題: Warfarin單鏈抗體之純化與特性描述
Purificaiton and characterization of scFv against warfarin
作者: 張嘉豪
關鍵字: warfarin;scFv
出版社: 生命科學系
摘要: 
Warfarin(3-(α-acetonylbenzyl)-4-hydroxycoumarin)是一種抗凝血劑藥物。其抗凝血機制是利用與vitamin K做競爭抑制,使體內vitamin K-dependent clotting factor的凝血因子(Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ)效用大幅下降而影響凝血機制,在醫療上可防止血栓形成。然而Warfarin也有許多副作用,過量時會造成血尿、嚴重出血以及維生素K缺乏症。現今對於warfarin中毒的治療方法多以直接投以維生素K以中和毒性,但仍然不盡理想,因此若能製備出抗warfarin的單鏈抗體,將可運用在臨床治療上。
本實驗經由免疫小鼠、製作融合瘤等前人實驗,經由細胞培養採集單株抗體,並萃取其RNA,由已知重鏈與輕鏈的固定區域當引子作反轉錄,得到抗體中的重鏈與輕鏈基因片段,利用連接子(Gly4Ser)3
,分別將連接子接於重鏈的C端與輕鏈的N端,最後藉由SOE-PCR (splicing by overlap extension PCR)產生所要的單鏈抗體片段並放大之。爾後基因轉殖,利用E. coli作大量表現,並以親合性管柱及硫銨沈澱作初步純化。單鏈抗體之效價測定,利用競爭型ELISA方法試驗,以單鏈抗體與先前採集之warfarin單株抗體作競爭,結果顯示有抑制效果。進一步進行動物實驗,觀察此單鏈抗體在老鼠體內可有效的抑制warfarin所造成的毒性致死。
URI: http://hdl.handle.net/11455/21539
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