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標題: Outer membrane protein PefD of Xanthomonas campestris pv. ampestris: Comparison of properties of lipid-modified and unmodified PefD
十字花科黑腐病菌外胞膜蛋白 PefD:脂蛋白與非脂蛋白 PefD 性質的比較
作者: 廖朝財
Tsai, Liao Chao
關鍵字: lipoprotein;脂蛋白;lipid modification;Xanthomonas campestris pv.;脂質修飾;十字花科黑腐病菌;蛋白質分泌
出版社: 分子生物研究所
摘要: 
PefD 為一種脂蛋白,是十字花科黑腐病菌胞外酵素分泌所必需。本研究利
用 BamHI 切割 pSC1810,回收 1.6kb 的 BamHI 片段,此片段含有四分之
三的 pefD 基因。接著次選殖入 pTZ19U 之 BamHI site,得到的質體命名
為 pCT1。pCT1 在 isopropyl-beta-thiogalactoside(IPTG) 的誘導下,
可產生大量的 LacZ-PefD 融合蛋白,其中 PefD 為主要部分,利用此蛋白
注射兔子所得的免疫抗體,經證明確實可偵測到十字花科黑腐病菌內完整
的 PefD 蛋白。此外,本研究並將 PefD 改造成非脂蛋白,然後將此一改造
過的 pefD 基因送入 XC1708 及 XC1715,兩者皆是 pefD 基因缺失突變
株,以觀察此種變化對其擔任協助胞外酵素分泌之功能是否有影響,經由互
補實驗之結果發現 PefD 是否為脂蛋白對其擔任的角色並無影響。而為了
更進一步瞭解脂質修飾對 PefD 蛋白在細胞中的分佈位置有無影響,本實
驗又進行了蔗糖密度梯度分析 (sucrose density gradient
fractionation) 及 trypsin 或 proteinase K digestion 之研究,兩項
實驗結果皆顯示脂蛋白 PefD 及非脂蛋白 PefD 均位於外胞膜,並無不同
。然而, pulse and chase 實驗結果卻很明確的顯示 mutant PefD前驅
物(precursor) 被 processed 速度較 wild type PefD 前驅物略為緩慢
URI: http://hdl.handle.net/11455/21622
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