Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/21629
標題: Studies of the Gene Cluster Required for Protein Export by Xanthomonas campestris pv. campestris
十字花科黑腐病菌胞外酵素分泌基因之研究: (1) ORF2 為胞外酵素分泌 所必需 (2) pefL 基因中具有一個內啟動子
作者: 王關成
Cheng, Wang Kuan
關鍵字: X. campestris;十字花科黑腐病菌;pef gene cluster;ORF2;pefN;pefL;internal promoter;胞外酵素分泌基因;內啟動子
出版社: 分子生物研究所
摘要: 
為確定 ORF2 是否為十字花科黑腐病菌胞外酵素分泌基因之一,本研究利
用基因定點突變方式, 在 ORF2 內創造 Hind III 切位, 做不同程度之刪
除得到各種重組質體。經由互補測試之結果, 證實 ORF2 基因亦為十字花
科黑腐病菌胞外酵素分泌所必需。另依 ORF2 胺基酸序列分析顯示, 此蛋
白產物 N-端具有一通過或嵌入內膜之疏水性前導序列區。 為了解 ORF2
蛋白產物是否必需依靠此 N-端之疏水性區到達其正確的位置方具功能,
本研究亦利用相同方式, 同時在 ORF2內之 N-端疏水性區改變兩個 Leu
成 Arg 及 Pro,期能破壞此一結構, 經由互補測試之結果, 得知 ORF2 蛋
白產物必需依靠此 N-端之疏水性區到達其正確的位置方具功能。此外,
為確定位於 pefL 基因內之疑似啟動子區域, 本研究利用構築於泛寄主性
載體之 cat 報導基因,觀察此區是否具有啟動 cat 基因之功能。經由
chloramphenicol 抗生素測試, 截自 pefL 基因之 0.4kb StuI 片段可在
大腸桿菌中啟動 cat 報導基因。 為更精確定出自位於 pefL 基因中的內
啟動子區域所轉錄之mRNA 的啟始位置,本研究進行primer extension。
實驗結果顯示, 在十字花科黑腐病菌中, 自胞外酵素分泌基因所合成之
mRNA, 其中之一的 5''-端啟始點,確實落在這 0.4kb StuI 片段內, 定出
之啟動子區域與得自 mini-Mu insertion 實驗的推斷相符。此外, 實驗
結果並顯示, 位於 pefL 基因中的內啟動子區域, 在上游啟動子存在之情
況下亦具功能性。
URI: http://hdl.handle.net/11455/21629
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