Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/21701
標題: 阿拉伯芥sos突變株在鹽逆境下AAA-type ATPase基因表現之分析
Expression of an AAA-type ATPase in Arabidopsis sos mutants under salt stress
作者: 賴建樺
Lai, JianHua
關鍵字: AAA-type ATPase;大量表現;SOS pathway;鹽敏感
出版社: 生命科學系
摘要: 
阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana)為一個模式植物,其基因組在2000年已經被完全解序,在耐鹽植物冰花中篩選到一鹽誘導基因mcSKD1(suppressor of K+ growth defect),經過胺基酸序列比對,發現與阿拉伯芥中的一個putative AAA-type ATPase (At2g27600)有很高的相似性,其蛋白質相似性達93 ﹪,故將此基因命名為atSKD1。利用RT-PCR方法擴增得到此基因之全長1308 bp,進一步以北方墨點法偵測阿拉伯芥在0 mM、100 mM及150 mM鹽濃度下atSKD1的基因表現,發現地下部的atSKD1之表現量會隨著鹽濃度上升而減少,但是地上部幾乎無偵測到atSKD1的表現。
由於北方墨點法偵測到atSKD1表現量很低,因此使用RT-PCR Southern 分析atSKD1在不同鹽濃度下的表現,以TINA 2.09e軟體進行量化分析,結果顯示在150 mM的鹽誘導下,地下部之atSKD1表現量比wild-type下降了29 ﹪。而以real-time PCR偵測其表現量,經過統計分析的結果,發現atSKD1在sos1(salt overly sensitive 1)突變株的表現量比wild-type低,sos3突變株之atSKD1表現量比wild-type高,推測若是atSKD1基因受到SOS pathway調控的階段應在轉錄後或轉譯後之修飾。
由於mcSKD1是隨著鹽濃度上升而提高表現的基因,而atSKD1卻是提高鹽濃度而降低表現,所以進一步將這兩個基因構築在農桿菌表現載體pBI121上,以基因轉殖的方法在阿拉伯芥中大量表現antisense之atSKD1與sense mcSKD1,利用siRNA的方式篩選鹽敏感之轉殖株,以及對鹽份有耐受性之轉殖株。由於SKD1為一essential gene,目前尚未獲得可存活之轉植株。
本實驗發現atSKD1基因是隨著鹽濃度而降低表現,在sos突變株中atSKD1的表現亦會受到影響,推測atSKD1基因的表現會受到SOS pathway所調控。
URI: http://hdl.handle.net/11455/21701
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