腫瘤抑制蛋白HLJ1與Beta-肌動蛋白形成複合物對肺腺癌細胞遷移及侵入能力之影響

Abstract

肺癌在全球已經成為癌症病患死亡的主要原因之一，且有逐年增加的趨勢。在我們先前的研究中，利用肺腺癌模式細胞株和微陣列技術，發現一個新的腫瘤抑制基因HLJ1，其屬於熱休克蛋白40 家族的一員，在腫瘤形成與轉移中扮演重要的角色且與病人的存活率有顯著相關。在本計畫中，為了釐清HLJ1 在細胞轉移和侵入過程中所扮演的角色，利用免疫沉澱/質譜分析方法發現，在轉移能力較低的肺腺癌細胞株中，有一些蛋白質能與HLJ1 相互作用，其中包括beta-肌動蛋白(ACTB)和熱休克蛋白70(HSC70)。共同免疫沉澱的結果顯示HLJ1 與ACTB 能彼此交互作用，形成一個多蛋白的複合體。而免疫螢光染色也初步顯示HLJ1 和ACTB 似乎會共同位在細胞質和核內，但是在不同轉移能力的肺癌細胞之間似乎有不同的結果。因此，我們計畫更進一步觀察HLJ1-ACTB 複合體的形成，在細胞轉移和侵入過程中所扮演的角色。我們將構築EGFP-HLJ1 和DsRed-ACTB 融合蛋白，並共同轉染至細胞來確定此複合體位在細胞質或核內，並評估此複合體是否會抑制細胞轉移及侵入能力。同時，我們將透過哺乳動物細胞蛋白質交互作用系統，來鑑定ACTB 與HLJ1 交互作用的區域。此外，計畫利用正常HLJ1 及不具有ACTB 結合區域的突變HLJ1 蛋白質，進行肌動蛋白聚合分析，以評估HLJ1 對細胞骨架結構或改變的影響。進一步，構築不含ACTB 結合區的負性優勢(dominant negative)HLJ1 質體，並轉染至細胞來偵測HLJ1-ACTB 交互作用對細胞遷移及侵入能力的影響，並以基因微陣列、調節路徑和轉錄因子資料庫來分析此交互作用可能調節的下游基因或參與的調控途徑。這些結果與努力將有助於我們探索HLJ1 基因參與腫瘤及癌轉移抑制過程中的可能作用機制，並勾勒出癌症轉移的過程。