Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/51017
標題: 一. 豬胰臟膽固醇脂�奶坐u業化生產及麟臨床檢驗套組之製備 二. 沙門式桿菌基因探針之選殖
作者: HUANG, JIN-FA
黃進發
關鍵字: 豬;胰臟;膽固醇;膽固醇脂;工業化;沙門式桿菌;選殖
出版社: 食品科技研究所
摘要: 
本研究之目的,在利用肉品加工廠廢棄物豬胰製備膽固醇酯,探討其工業化生產之
條件、方法及配製膽固醇檢驗套組,以供臨床膽固醇檢驗套組製備之用。本報告採用
三種方法進行此酵素之製備。方法一,係依據lABOW (13)等人所述方法,結果由
粗酵素液到Sephadex G-200管柱層析步驟,當以PNPA 為基質時,酵素回收率為1
4.3%,比活性提高3.69倍,若以cholesterol acetate 為基質時,則回收率
幾乎為零,而比活性降低甚鉅,同時不能應用到檢驗套組之製備。其原因為:①膽鹽
為酵素活性所必須;②可能凝乳胰蛋白於純化過程中活化,水解膽固醇酯活性測
定之基質,方法並不可靠。
方法二概述如下.由25g豬胰臟丙酮粉末依Hernandez⑽等人所述方法,收集30∼
60硫酸銨沈澱區分,添加5mg/ml膽鹽進行透析,再經33%酒精去除沉澱及冷凍
乾燥後可得1.5g 酵素粉末,比活性提高0.48倍,回收率為20.0%,由此
方法所得之酵素粉末,可應用於膽固醇檢驗套組之製備,這些套組在25℃下,可經
8小時放置;或4℃下一週以上之放置;其活性不變,相當穩定。並且套組在25℃
下,可經8小時放置;或4℃下一週以上之放置;其活性不變,相當穩定。並且套組
中鹽濃度以添加15mg/ml,酵素濃度在0.5mg/ml(75units /l ),可得最
佳之反應活性。
方法三為上述方法二之改進,適合工業化生產;由20g 胰臟丙酮粉末經含硫酸銨及
膽鹽溶液萃取豬胰臟膽固醇酯,再經添加大豆蛋白抑制劑及PMSF(phenyl meth-
yl sulfonyl fluoride)於酵素液中,經隔夜透析,冷凍乾燥可得4.22g 酵素粉
末,比活性未見提高,回收率25.1%,由此酵素製備之膽固醇套組,其穩定度、
可靠度合乎要求。
本研究之目的,乃在尋找沙門氏桿菌特異性純係(clone ),以應用到食品沙門氏桿
菌污染之快速檢驗上。由S.typhimurium染色體DNA,經限制Bam HI切割完全後,回收
4.1kb及4.9kb附近之DNA片段,再分別與pUC13及YEp13 載驗黏接,經轉形
作用後,分別由101(以pUC 13當載體)及192個(以YEp 當載體)轉形細胞
中,選拔到64個Lac 及19個Ap Tc 轉形細胞,最後以限制Bam HI和Eco RI分
別進行切割,分析其DNA大小,其中共有5個純系,可能插入S.gyphimurium4.1kb
或4.9kb特異性DNA片段。需經進一步與大腸桿菌,沙門氏桿菌及其他細菌等作DNA
雜交試驗才能確定。
URI: http://hdl.handle.net/11455/51017
Appears in Collections:食品暨應用生物科技學系

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