Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/51797
標題: 以各種轉錄及分泌元件之組合表現重組抗凍蛋白於大腸桿菌及乳酸菌宿主
Expression of recombinant antifreeze protein in Eschreichia coli, Lactobacillus paracasei and Lactococcus lactis by various transcreption and secretion signals
作者: 林怡伶
關鍵字: 乳酸菌;訊息胜
出版社: 食品科學系
摘要: 
乳酸桿菌(Lactobacillus paracasei)及乳酸球菌(Lacotococcus lactis NZ9000)為食品級宿主,均屬於乳酸菌( lactic acid bactria, LAB )之一員,泛指一群可醱酵醣產生之乳酸之菌,為厭氧之革蘭氏陽性菌。乳酸菌長久以來便被使用於食品工業上,舉凡食品之發酵、保鮮及防腐等,均扮演重要的角色,可用來生產具特殊風味之產品。近年來由於研究發現乳酸菌具有分泌異源蛋白質的能力,故利用其作為表現宿主,生產具有醫療功效之蛋白質。抗凍蛋白為寒帶魚類血液中發現之抗凍因子,可降低凍結點、修飾冰晶構型使冰晶變小、抑制冰晶之再結晶作用,本研究以八個重複胺基酸單元之重組第一型抗凍蛋白作為報導基因。
本實驗以三種轉錄及分泌元件構築表現載體。轉錄元件為乳酸球菌Lactococcus lactis usp45 啟動子、枯草桿菌 σ A型啟動子,乳酸球菌Lactococcus lactis nisA啟動子。分泌元件為Lactococcus lactis Usp45訊息胜及枯草桿菌鹼性彈性蛋白訊息胜。於大腸桿菌中,σ A型啟動子及鹼性彈性蛋白訊息胜之組合可順利表現抗凍蛋白且於胞外偵測到抗凍白之存在。於乳酸桿菌中,σ A型啟動子及usp45 啟動子均可成功轉錄抗凍蛋白基因,而具有σ A型啟動子-鹼性彈性蛋白訊息胜之表現載體可將抗凍蛋白分泌至胞外,但所觀察到之產物分子量較小,可能為經由酵素降解結果。於乳酸球菌中,利用nisin誘導nisA啟動子進行蛋白質表現,於胞內純化結果證實抗凍蛋白之表現,但經由誘導之表現量較低,推測由於nisin本身為抑菌素,因而降低宿主之生長,至於未經誘導而表現之情形,可能為其他誘導物作用使然。未來可由本實驗作為基礎,開發有效生產抗凍蛋白的乳酸菌,以用於GRAS級宿主生產抗凍蛋白,進而應用於生醫或食品方面。
URI: http://hdl.handle.net/11455/51797
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