Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/52107
標題: Cloning and Characterization of Novel D-Amino Acid Oxidase from Yeast-DNA Sequencing and Gene Expression(II)
酵母菌特殊D型胺基酸氧化脢的選殖及其特性 之研究-DNA定序及基因表現(II)
作者: 許文輝
關鍵字: 生物技術;基礎研究;D-amino acid oxidase;D型胺基酸氧化?;去氧核醣核酸定序;基因表現;蛋白質工程;頭孢菌素C;酵母;DNA sequening;Cephalosporin C;Gene expression;Proteinengineering;Yeast
摘要: 
D型胺基酸氧化�(D-amino acid oxidase,以下簡稱 DAO�)屬Flavoenzyme,以FAD為輔成基,此種酵素能氧 化D型胺基酸,生成酮酸.DAO�廣泛存在於各種不 同的微生物及動物組織.截至目前為止,已發現 Fusarium solani及Trigonopsis variabilis能很有效率的將Cephalosporin C(Ceph C)轉變成7-.beta.-(5-carboxy-5-oxo-pentanamido)-cephalosporinic acid( keto-AD-7ACA),隨後再由H/sub 2/O/sub 2/轉化成7-.beta.- (4-carboxybutanamido)cephalosporanicacid(GL-7ACA),GL-7ACA 可由GL-7ACA acylase再轉變成7-amino-cephalosporanicacid (7ACA).7ACA是Cephem抗生素的原體(Starting material).目前利用化學法生產7ACA,過程太複雜, 成本也高,因此製藥業一直想要開發更有效的 7ACA生產方法,酵素法將是最好的選擇.在所有的微生物當中,就目前所知,酵母菌T. variabilis的DAO �對Ceph C有最好的轉換能力.然而,轉換當中伴 生的H/sub 2/O/sub 2/會抑制DAO�的活性,並使其惰 化,因而導致反應不穩定.不但如此,由於DAO�的 最適反應為pH 8.在pH 8的反應條件下,Ceph C及其 衍生物會發生分解.我們已篩到一株酵母菌 Rhodosporidium toruloides,其所產生的DAO�能將Ceph C 轉變成Keto-AD-7ACA,正進行基因選殖.本計畫的目 的在於:(1)繼續篩選DAO�生產菌;(2)完成DAO�基因的定序並分析其結構;(3)修改DAO�基因的 Promoter,以提昇其在Saccharomyces cerevisiae菌體內的 表現能力.這些將可做為利用蛋白質工程改良 DAO�性質之參考依據.
URI: http://hdl.handle.net/11455/52107
其他識別: NSC83-0418-B005-031-BA
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