X. campestris 染色體物理圖譜之建立

Abstract

本計畫為「Xanthomonas campestris 分子生物學之 研究」群體計畫的一個子計畫.群體計畫於本 年度進入第二年,但本子計畫則於本年度才開 始加入,因此擬以兩年的時間完成 X.campestris strain 17 (Xc17)之染色體物理圖譜.X. campestris 為 生產黃原膠的工業用菌,也是引起十字花科黑 腐病的病原細菌.過去,由於有關之研究都以植 物病理學及發酵生素為主,而且傳統細菌遺傳 技術又無法應用於研究本菌,因而迄無genetic map可用.晚近由於rare cut enzyme的使用及pulsed-field gel electrophoresis之應用,已有多種細菌之染色體 的physical map被訂定出來.因此,為了最終建立X. campestris的genetic map乃提出本計畫,擬以兩年的 時間先建立physical map及部分概略genetic map,供將 來建立genetic map之參考.本年度擬完成下列工作 :(1)完成染色體DNA樣品之製備,找到適合切割(切 出之片段在三十個上下者)的restriction enzyme,找 到適合的PFGE條件;(2)以restriction fragments分子量 之總和定出Xc17的染色體之分子量;(3)選殖end clones及linking clones;(4)Tn5 mutagenesis篩選mutant約30 株.