Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/57447
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dc.contributor桂齊恆zh_TW
dc.contributor閻啟泰zh_TW
dc.contributor.author許文輝zh_TW
dc.contributor.author李晏忠zh_TW
dc.date2010-04zh_TW
dc.date.accessioned2014-06-06T09:24:13Z-
dc.date.available2014-06-06T09:24:13Z-
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11455/57447-
dc.description.abstract本發明由藍綠藻Anabaena sp.CH1選殖N-乙醯-D-葡萄糖胺2-表異構酶基因(bage),bage基因長1,167bp,轉譯出來的蛋白質之分子量為43 kDa。將bage基因與E.coli NeuAc解離酶(NeuAc lyase)基因共同或個別在E.coli內大量表現,以此E.coli菌體做為全細胞生物觸媒,將N-乙醯-D-葡萄糖胺(GlcNAc)與丙酮酸(pyruvate)直接催化合成N-乙醯-D-神經糖胺酸(NeuAc)。當反應液內GlcNAc與丙酮酸的濃度皆為1.2 M時,GlcNAc轉換率為33.3%,NeuAc產率達到10.2 g NeuAc/L-h。全細胞生物觸媒在循環使用8次後,GlcNAc轉換率及NeuAc產率仍能維持80%以上。此全新的全細胞生物觸媒合成NeuAc之製程,具有高產率、高觸媒循環使用性以及不需添加ATP等優點。 【創作特點】 有鑒於既有生產NeuAc仍存在諸多問題,本發明主要係提供一種有效生產NeuAc的方法以克服既有生產方法的困難。 為達成前述目的,本發明主要係提供一種經分離之核酸分子,其係包含SEQ ID NO.1,且編碼出一種將N-乙醯-D-葡萄糖胺(N-acetyl-D-glucosamine)轉換成N-乙醯-D-甘露糖胺(N-acetyl-D-manosamine)的酵素(bAGE)。 本發明另相關於一種重組載體,其係為寄存於財團法人食品工業發展研究所之寄存編號BCRC940532的重組載體。 較佳的是,該載體包含具有SEQ ID NO.1所示序列之核酸分子,其利用Nde I以及Xho I分別為5’以及3’切位接入pET32a表現載體中。 較佳的是,該載體轉譯一種將N-乙醯-D-葡萄糖胺(N-acetyl-D-glucosamine)轉換成N-乙醯-D-甘露糖胺(N-acetyl-D-manosamine)的bAGE酵素;更較佳的是,該載體所轉錄的酵素其分子量為44.7 kDa;最佳的是,該載體所轉錄的酵素包含SEQ ID NO.4序列。 本發明另相關於一種生產將N-乙醯-D-葡萄糖胺(N-acetyl-D-glucosamine)轉換成N-乙醯-D-甘露糖胺(N-acetyl-D-manosamine)酵素之微生物,其中該微生物係包含如申請專利範圍第1項所請的核酸序列。 較佳的是,該宿主細胞為原核細胞;更該原核細胞包括E.coli;最佳的是,係為寄存於財團法人食品工業發展研究所之寄存編號BCRC940532的微生物。 本發明另相關於一種大量生產N-乙醯-D-葡萄糖胺2-表異構酶(N-acetyl-D-glucosamine 2-epimerase;bAGE)酵素的方法,包括下列步驟:將前述所請之微生物培養於培養液中;及自培養液中收取N-乙醯-D-葡萄糖胺2-表異構酶酵素。 較佳的是,回收方法係利用管柱層析進行;更佳的是,N-乙醯-D-葡萄糖胺2-表異構酶酵素之活性半衰其為48小時。 較佳的是,N-乙醯-D-葡萄糖胺2-表異構酶酵素其對二價金屬離子Mg 2+ 、Mn 2+ 、Zn 2+ 、Ca 2+ 、Co 2+ 及Ni 2+ 不具抑制或提昇其活性效果。 本發明另相關於一種生產N-乙醯-D-神經糖胺酸(N-acetyl-D-neuraminic acid)的方法,其係包含:將前述所生產之N-乙醯-D-葡萄糖胺2-表異構酶與N-乙醯-D-葡萄糖胺及丙酮酸共同反應,其中N-乙醯-D-葡萄糖胺2-表異構酶與NeuAc解離酶以1:4~1:24的比例共同作用。 較佳的是,N-乙醯-D-葡萄糖胺2-表異構酶與NeuAc解離酶的比例係為1:16;更佳的是,GlcNAc濃度為0.1-1.5M,丙酮酸濃度為0.1-1.5M;最佳的是,GlcNAc濃度為0.8M,丙酮酸濃度為1.2M。 藉此,本發明可利用bAGE與NeuAc解離酶全細胞觸媒之重複使用性,大幅提高生產NeuAc的產率與效率。zh_TW
dc.language.isozh_TWzh_TW
dc.publisher分子生物學研究所zh_TW
dc.relation.urihttp://twpat.tipo.gov.tw/tipotwoc/tipotwkmen_US
dc.title生產N-乙醯-D-神經糖胺酸(N-acetyl-D-neuraminiczh_TW
dc.titleacid) 的方法及其應用zh_TW
dc.typePatentzh_TW
item.grantfulltextnone-
item.openairetypePatent-
item.cerifentitytypePublications-
item.fulltextno fulltext-
item.languageiso639-1zh_TW-
item.openairecristypehttp://purl.org/coar/resource_type/c_18cf-
Appears in Collections:分子生物學研究所
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