Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/62877
標題: 十字花科黑腐病菌胞外酵素分泌基因XpsD變異株之構築
Construction of Mutated XpsD Gene Required for Protein Secretion by Xanthomonas campestris pv. campestris
作者: 胡念台
關鍵字: 基礎研究;Protein secretion;生物技術;蛋白質分泌;格蘭氏陰性菌;外胞膜;基因變異;十字花科黑腐病菌;Gram-negative bacteria;Outer membrane;Gene mutation;Xanthomonas campestris
摘要: 
格蘭氏陰性菌於胞內合成之蛋白質,必須通 過兩層厭水性強之細胞膜,方可達到胞外,近年 來的研究顯示,格蘭氏陰性菌的胞外蛋白分泌 機制,至少有三類,第一類胞外蛋白具有典型的 N-端訊號序列(Signal peptide),被分泌時,先穿過內 胞膜,再穿過外胞膜,這類蛋白質穿過內胞膜之 過程,目前一般相信,可能無異於一般穿過內胞 膜之胞質週緣區(Periplasmic)蛋白或外胞膜蛋白, 靠著Sec基因產物完成,此外,另有12至14個基因為胞外蛋白通過外胞膜所必須;第二類與第三類 胞外蛋白,則不具有N-端訊號序列,也不依靠Sec 蛋白,各自需要不同的基因產物,完成分泌負責 十字花科黑腐病菌胞外酵素分泌的基因,屬於 第一類,其中一個基因的蛋白產物,XpsD,又和參 與第三類分泌機制的蛋白之一,YscC等相似;XpsD 是一個N-端經過修飾的脂蛋白,主要分布於外胞 膜;胺基酸序列與XpsD相似的蛋白,除了YscC等,其 他負責同類分泌機制的蛋白PulD、OutD、XcpP,還 有負責Filamentous phage拼裝(Assembly)的pIV參與type IV pili拼裝的PilQ及DNA transformation所必須的OrfE. 為了探討格蘭氏陰性菌第一類分泌機制中,胞 外蛋白通過外胞膜的現象,本計畫打算從不同XpsD變異基因的構築著手,藉由變異基因對其功 能造成的影響,以便了解XpsD本身構造與其參與 胞外蛋白分泌功能間的相關性,欲探討的問題 包括:XpsD N-端脂質修飾的必要性,XpsD N-半邊和C- 半邊胺基酸序列,各自的重要性及XpsD那些胺基 酸序列的改變足以影響其分泌功能?回答前二 項問題,打算經由試管內基因重組的方式進行, 回答第三項問題,打算嘗試Linkerinsertion及Base substitution兩種方式,以達到Random mutation的目的.
URI: http://hdl.handle.net/11455/62877
其他識別: NSC84-2311-B005-019
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