Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/62920
標題: 枯草桿菌Sigma-A因子和起動子-10DNA結合區域之構造及功能研究
Structural and Functional Studies of the Promoter-10 Binding Region of Bacillus subtilis Sigma-A Factor.
作者: 張邦彥
關鍵字: 基礎研究;Promoter;生物技術;起動子;□-螺旋體;轉錄起始作用;螺旋體柱;疏水性力;疏水性作用;□-helix;Transcription initiation;Helical cylinder;Hydrophobicity;Hydrophobic interaction
摘要: 
本研究之目地在於探討Sigma-A蛋白和起動子- 10DNA結合之2.4區域□-helix構造中之疏水性胺基酸 對Sigma-A蛋白構造之穩定,以及對轉錄起始作用之 功能.根據我們的研究,這個a-螺旋體疏水性面上 之疏水性胺基酸在Sigma-A蛋白自由存在的狀態下可能會和該蛋白上其他疏水性胺基酸結合而使該 蛋白得以穩定存在.但是當這個蛋白和RNA Polymerase 之Core Enzyme結合以後,這一些疏水性胺基酸將暴露 出來和起動子-10DNA結合,以促使轉錄起始作用順 利進行.為了確定這個a-螺旋體疏水性面上之疏水 性胺基酸在轉錄起始作用中扮演如此重要角色之 想法,以及解答單一個a-螺旋體之蛋白二級結構如 何和DNA進行結合的問題,乃提出本研究計畫.本研 究擬利用定位突變的方式製造六種突變型Sigma-A 基因.其中兩種突變型之設計在於中斷這一個a-螺 旋體之構造,以減少這個a-螺旋體疏水性面的長度 .另外的四種突變則在於改變這一個疏水性面之 疏水性能力.這六種突變基因將用來研究Sigma-A蛋 白2.4區域之in vivo及invitro特性,以了解這個區域 之功能和構造關係.在in vivo特性研究中,這些突變 型Sigma-A基因將穿插入Bacillus subtilis染色體上取代 野生型Sigma-A基因,以藉此探討它們對B. subtilis表 現型的影響.由於這些突變都在Sigma-A蛋白內部,根 據蛋白結構穩定的觀念,我們預期這些Sigma-A蛋白 在結構之穩定度上會有所差異,並且極可能會有 對溫度敏感之B. subtilis突變株出現.這種B. subtilis 對溫度敏感之現象可能導因於Sigma-A蛋白本身構 造之不穩定,亦可能由於在高溫下Sigma-A蛋白和起 動子-10DNA間之疏水性結合力降低之故.更進一步 突變型Sigma-A蛋白2.4區域invitro特性之研究,則在 於提供一些解答這個問題的生化分析資料.大量 生產及純化突變型Sigma-A因子,然後於不同溫度下進行該等因子和RNA Polymerase Core Enzyme之重組,並測 定它們在invitro轉錄作用過程中之活性,以提供解 答上述問題之生化證據.
URI: http://hdl.handle.net/11455/62920
其他識別: NSC82-0418-B005-028
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