Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/11455/66453
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dc.contributor.advisor張天傑zh_TW
dc.contributor.advisorTien-Jye Changen_US
dc.contributor.author鄭珮儀zh_TW
dc.contributor.authorCheng, Pei-Yien_US
dc.contributor.other中興大學zh_TW
dc.date2008zh_TW
dc.date.accessioned2014-06-09T09:31:51Z-
dc.date.available2014-06-09T09:31:51Z-
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11455/66453-
dc.description.abstract假性狂犬病毒(Pseudorabies Virus; PRV)亦稱為猪第一型疱疹病毒,屬於阿爾法疱疹病毒亞科之ㄧ員,是一種具有封套的DNA 病毒。研究指出PRV 基因的表現是層階式的,依據其出現的順序可分為三類,分別是立即早期(immediate-early, IE)、早期(early, E)、及晚期基因(late, L),此三期基因依序出現且彼此調控。前人的實驗證實當猪隻受到 PRV 感染時,其輔助型 T 淋巴球會增加並且會促使IL-2 的分泌,但是關於其真正作用的詳細機轉目前仍不清楚,因此本實驗主要目的即是探討 PRV 對於猪IL-2(sIL-2)啟動子的調節機制。 本試驗首先以PCR 的方式得到全長為 2.2-kb 的 sIL-2 啟動子,接著再將之選殖到CAT 報導載體中。為了更進一步了解 sIL-2 啟動子的功能區域及DNA 的作用位置,我們依序由5’端進行刪除,產生五種不同長度的sIL-2 啟動子,並証實它們皆具有活性。接著再以 superinfection 的方式來探討 PRV 對這些啟動子的調控情形,結果發現在PRV 感染後的6 小時,五種不同長度的sIL-2 啟動子活性皆有明顯增加的趨勢,在12 小時的效果最明顯。之後,我們想更近一步了解此種情形是受病毒哪個時期的基因調控,因此使用了不同的抑制劑來觀察,分別是Phosphonoacetic acid (PAA:抑制DNA合成)、Actinomycin D (AD: 抑制transcription)、及cycloheximide (CHX: 抑制蛋白質合成)。由於病毒IE 蛋白產生並不需要任何病毒蛋白的參與,因此當PAA 及AD 存在時並不會抑制IE 蛋白的合成,但若加入蛋白質抑制劑CHX 時,則病毒IE 蛋白不會產生。結果顯示,當PAA 及AD 存在時,PRV 仍然可以造成sIL-2 啟動子活化,而當CHX 存在時,PRV 則無法活化sIL-2 啟動子,由此結果推測PRV 可能會藉由IE蛋白來調控sIL-2 啟動子。為了更近一步證實此假說,我們將含有五種不同長度sIL-2 啟動子之報導載體分別與含PRV IE180 或EP0 的真核表現載體,利用 LMtk-細胞進行 transient cotransfection,以CAT assay 來進行分析IE180 與EP0 對這些啟動子的調控情形。結果顯示低劑量的IE180 與EP0確實會活化sIL-2 啟動子,但當濃度增加後,則反而有抑制的現象。综合以上結果可知 PRV 會藉由IE180 及EP0 蛋白來調節sIL-2 啟動子,而且此種調控並不受IE like binding site、NF AT、及TFIID 等transcription factorbinding site 的影響,故推測PRV 可能會藉由其他途徑來活化sIL-2 啟動子。zh_TW
dc.description.abstractPseudorabies virus (PRV) is a swine alphaherpesvirus that can cause Aujeszky,s disease. Previous reports indicated that the PRV transcription is regulated in a cascade-like fashion. The genes are classified into three kinetic classes in viral lytic infection: immediate-early (IE), early (E), and late (L). In previous study it was demonstrated that the PRV can stimulate T helper lymphocytes to secrete IL-2 in vitro, but the regulation of the IL-2 activation pathway is still not very clear. In this study, we explored the molecular mechanism of swine IL-2 (sIL-2) promoter regulation. The sIL-2 promoter region of 2.2-kb in length was generated by PCR and was subcloned into a CAT reporter vector. To identify the DNA response element, functional promoter assay with progressively 5'deleted sIL-2 promoter fragments was performed. In a superinfection assay, we transfected various sIL-2 promoter reporter plasmids into LMtk- cells, the results showed that PRV infection could enhance the activity of five different sIL-2 promoters at 6 h postinduction. When the sIL-2 promoter was co-transfected with PRV IE180 or EP0 expression vector, it showed that a low concentration of IE 180 or EP0 could enhance activity of sIL-2 promoter whereas were suppressed by a high dose of IE 180 or EP0. In summary, we demonstrated that the sIL-2 promoter could be regulated by the IE180 or EP0 of PRV.en_US
dc.description.tableofcontents中文摘要 ........................................................................................................................i 英文摘要 ......................................................................................................................iii 目次 ..............................................................................................................................iv 圖表次 ..........................................................................................................................vi 第一章 序言 …………………………………………………………………….…….1 第二章 文獻探討 ……………………………………………………………….…….2 第一節假性狂犬病之歷史背景…………………………………………….……...2 第二節 假性狂犬病毒之分類命名、型態及其特………………………….…….2 第三節 假性狂犬病毒之潛伏感染…………………………………….………….3 第四節 假性狂犬病毒基因體的結構及顆粒成分..................................................4 第五節 假性狂犬病毒基因的表現、基因產物及生物功能……………………..5 第六節 假性狂犬病毒醣蛋白的種類和特性..........................................................8 第七節 假性狂犬病毒立即早期基因之研究………………………….………...12 第八節 假性狂犬病毒早期基因(EP0)之研究………………………….……….13 第十節 假性狂犬病毒之免疫反應………………………………….…………...17 第十一節 假性狂犬病毒與猪介白素2 (Interleukin-2)的關係……….…………18 第三章 材料與方………………………………………………………………….….20 1.病毒…………………………….………………………………………………..20 2.病毒增殖培養及純化………………………….………………………………..20 3. sIL-2 promoter載體之建構………………..………………………….………..20 3.1聚合酶連鎖反應…………………………………..……….………..20 3.2 PCR產物的純化…………………………………………….………21 3.3.接合作用 …………………………………….………....................21 3.4.勝任細胞之製備…………………………………….………..........22 3.5轉形作用………………………………………….............................22 3.6小量質體的製備………….…………………………………………22 4.不同長度sIL-2 promoter-CAT表現載體的構築…………………...………….23 4.1.全長sIL-2 promoter-CAT的建構..………………………………..23 4.2 sIL-2pd-CAT、sIL-2p2-CAT、sIL-2p3d-CAT、sIL-2pfd-CAT表現載體的建構……………………………………………………………24 (五) 轉染作用…………………………………… ………………………………24 (六) Chloramphenicol acetyl transferase (CAT) assay………….……...…………25 第四章 結果………………………………………………….……………….………13 1. 不同長度豬介白素2啟動子載体之建構……………………....……………..27 2.以superinfection來探討PRV對豬介白素2啟動子之調控情形……….……27 3.利用不同的病毒抑制劑來探討PRV對豬介白素2啟動子之調控…………..27 4.探討將PRV的IE與EP0對豬介白素2啟動子之調控情形…………………28 第五章、討論…………………………… ……………………………………………29 參考文獻………………………………………………………………………………32zh_TW
dc.language.isoen_USzh_TW
dc.publisher獸醫微生物學研究所zh_TW
dc.subjectpseudorabies virusen_US
dc.subject假性狂犬病毒zh_TW
dc.title假性狂犬病毒對猪介白素2基因表現之調控zh_TW
dc.titleRegulation of Swine IL-2 Gene Expression orProduction by Pseudorabies Virus Infection.en_US
dc.typeThesis and Dissertationzh_TW
item.languageiso639-1en_US-
item.cerifentitytypePublications-
item.grantfulltextnone-
item.openairetypeThesis and Dissertation-
item.openairecristypehttp://purl.org/coar/resource_type/c_18cf-
item.fulltextno fulltext-
Appears in Collections:微生物暨公共衛生學研究所
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