台灣鴨鵝環狀病毒抗體檢測技術之建立與防治方法之研究

Abstract

鵝環狀病毒(Goose circovirus,GoCV)與鴨環狀病毒(Duckcircovirus,DuCV)為新興之水禽傳染病源，此二病毒分別於1999 年及2003年間於德國地區首度發現，而台灣地區之GoCV 與DuCV，則是由本研究室分別於2001 年及2003 年間於雲林及屏東等地發現。序列分析結果顯示，台灣GoCV 分離株與德國GoCV 相當接近，但台灣DuCV 分離株則可分為兩型，一型為與德國DuCV 株類似者（96%序列相同性），另一型則為與德國DuCV 株相距較遠者（82%序列相同性）。除序列分析外，本研究室也建立了以PCR 及定量PCR 來診斷與區分GoCV 與DuCV 之技術。由於GoCV 與DuCV屬新發現之病毒，目前仍無任何抗體檢測方法與疫苗可供使用，本計劃即擬以兩年時間，對台灣地區鴨鵝環狀病毒之致病力、抗體檢測，與疫苗開發工作進行研究，研究之重點有四項：第一項為DuCV 不同基因型分離株（本土型與德國型）之致病力比較研究;第二項為建立GoCV 與DuCV 抗體力價檢測方法之標準程序，方法為以原核(E.coli)及真核（桿狀病毒/昆蟲細胞）系統，表現GoCV 與DuCV 之Rep 與Cap 蛋白作為抗原，另外也將進行病毒顆粒之純化作為抗原，再以上述三種來源之抗原，分別建立Western blot 與ELISA 技術，藉以評估何者為最佳抗原，並建立GoCV 與DuCV 抗體檢測之標準程序。第三項工作則是GoCV 與DuCV 次單位疫苗與不活化疫苗之研發，方法為以原核及真核系統所表現之Cap 蛋白，以及純化之病毒顆粒，分別研製不活化疫苗，並免疫鴨、鵝隻後，以攻毒試驗判定上述三種疫苗之效能，並評估次單位疫苗之潛力。第四項工作則是建立GoCV 與DuCV 之〝感染性選殖株〞(infectious clone)，並藉以開發GoCV與DuCV 之基因缺損活毒疫苗。本研究室目前已完成台灣DuCV〝感染性選殖株〞質體之構築工作，在此計劃中，將持續進行GoCV〝感染性選殖株〞之構築工作，並以肌肉注射、華氏囊內注射及其它方式測試其感染力。如獲成功，將再以定位突變法，針對病毒之promoter/enhancer 區域進行突變，藉以開發弱毒株疫苗。總結而言，雖然水禽環狀病毒之致病力目前仍未有定論，但近年來諸多研究顯示，分離自各種動物之環狀病毒，多數皆具致病性或免疫抑制能力。由於GoCV 與DuCV 屬新近發現之病毒，其相關之研究報告相當少，因此本研究之成果將具有重要學術價值，另一方面，由本研究所建立之抗體診斷技術與疫苗研發相關成果，也有助於台灣地區水禽類環狀病毒之防治，對本土養禽產業之競爭力將有所助益。